NS-1细胞（无支原体、保成活）

杂交瘤细胞复苏失败原因

最近，我把杂交瘤细胞复苏了，可是做了三次都死掉了。同期复苏的SP2/0却能活。1，我的细胞是在-76保存，放了半年，2，-76的冰箱温度有波动，经常打开门，3，细胞复苏后大量死亡，但是也有很少的比较圆的透亮的活细胞，4，细胞不贴壁，第二天就就死了，5，复苏的过程正常，37度速解冻。请高手帮忙分析一下，或者遇到相同问题的朋友分析交流一下。丁香园网友haha63认为：没按规定保存在液氮所致！细胞切记不要保存在－80度冰箱内。哪怕短暂保存在－80也会对细胞有伤害。丁香园网友yusi100认为：我认为

慢病毒包装流程与原理：从质粒到滴度，一步步说清楚

T 瞬时转染包装流程，照着走就行： 设计载体：确认目的基因、启动子、荧光/抗性标记，构建慢病毒穿梭质粒。大基因（>4 kb）建议换 GV747 专用载体保出毒。 铺 293T 细胞：转染前把 293T 铺到适合密度（一般转染当天 60-80% 融合度最佳），保证状态好、无支原体。 配质粒混合液：按约定比例混合穿梭质粒、pspAX2、pMD2.G（以及必要时的 rev 质粒）。比例很关键，常见是穿梭:包装:包膜 ≈ 1:1:1 附近，具体以体系说明为准。 转染：用转染试剂（如 Lenti-Pro

细胞培养的操作步骤

)内，应处于绝对静置状态，切忌不时地取出培养瓶观察生长状况，这将使原代分离细胞难以贴壁，更谈不上伸展和增殖，初学者尤应注意。不必担心培养液中的营养成分会消耗光，在细胞增殖之前对营养的要求并不大。原代培养初期仅加一薄层培养液的目的也在于有利于细胞贴壁伸展。 （7）消化时间：一般消化至肉眼尚可见微小组织颗粒即可，因为此时组织颗粒已经松散，略经吹打即成细胞团或单个细胞，过久的消化往往导致细胞损伤加重，细胞培养成活率降低。 （8）其他生长因子：经过以上处理，一般原代分离细胞培养均可以成功。对于少数特殊