NS-1细胞（无支原体、保成活）

杂交瘤细胞复苏失败原因

最近，我把杂交瘤细胞复苏了，可是做了三次都死掉了。同期复苏的SP2/0却能活。1，我的细胞是在-76保存，放了半年，2，-76的冰箱温度有波动，经常打开门，3，细胞复苏后大量死亡，但是也有很少的比较圆的透亮的活细胞，4，细胞不贴壁，第二天就就死了，5，复苏的过程正常，37度速解冻。请高手帮忙分析一下，或者遇到相同问题的朋友分析交流一下。丁香园网友haha63认为：没按规定保存在液氮所致！细胞切记不要保存在－80度冰箱内。哪怕短暂保存在－80也会对细胞有伤害。丁香园网友yusi100认为：我认为

细胞培养的操作步骤

)内，应处于绝对静置状态，切忌不时地取出培养瓶观察生长状况，这将使原代分离细胞难以贴壁，更谈不上伸展和增殖，初学者尤应注意。不必担心培养液中的营养成分会消耗光，在细胞增殖之前对营养的要求并不大。原代培养初期仅加一薄层培养液的目的也在于有利于细胞贴壁伸展。 （7）消化时间：一般消化至肉眼尚可见微小组织颗粒即可，因为此时组织颗粒已经松散，略经吹打即成细胞团或单个细胞，过久的消化往往导致细胞损伤加重，细胞培养成活率降低。 （8）其他生长因子：经过以上处理，一般原代分离细胞培养均可以成功。对于少数特殊

血清使用问题的总结

的GIBCO胎牛血清到2007年5月还能用吗？答：只有试试了，如果一直在-20℃冻着来者，应该还可以，先少用点看看。养细胞系应该没问题，原代不行。2、问：请问我自然溶化好的胎牛血清和1640培养基今天用不上，明天用，我不想放到冰箱里，放在室温下一晚行吗？100毫升培养瓶加多少培养基呢？答：可以放4℃。4-5ml。3、问：4℃冰箱内保存3个月的胎牛血清，能否继续使用？相关细胞和其它试剂的代价比较高，不敢轻易尝试。答：需要长期保存的胎牛血清必须要保存在-20至-70℃的低温冰箱中，4℃冰箱中保存时间不要超过