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rAPid碱性磷酸酶
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rAPid Alkaline Phosphatase
需确认
嵘崴达
−20°C
1000 units
rAPid碱性磷酸酶是从牛肠中分离的碱性磷酸酶,作为在毕赤酵母(Pichia Pastoris)中表达的56kD重组酶提供。重组形式确保了一致性和安全性。rAPid碱性磷酸酶能够催化DNA和RNA、核苷酸和蛋白质的5′磷酸盐的去磷酸化。碱性磷酸酶处理可去除连接酶所需的5′-磷酰基末端,从而防止DNA片段的自我连接;该特性能够减少载体背景,对于克隆策略非常重要。与小牛肠道磷酸酶不同,rAPid碱性磷酸酶在+75 °C下热处理2分钟,可快速、完全且不可逆地灭活。因此,它是虾碱性磷酸酶的出色替代品。此外,该酶在限制酶缓冲液中具有活性。因此,无需纯化步骤,即可完成限制酶消化、去磷酸化、酶失活、连接或5′-末端标记。
碱性磷酸酶可以催化许多磷酸酯的水解,如伯醇和仲醇、糖、环醇、酚和胺的酯。与磷酸二酯不反应。该酶能水解无机焦磷酸盐。酶的动力学性质取决于许多因素,如酶的纯度、测定中酶的浓度、缓冲液、pH等。热灭活:通过在75℃温育2分钟,可以灭活rAPid碱性磷酸酶。
• rAPid碱性磷酸酶可用于许多应用,包括:从核酸中去除5′-磷酰基 • 制备用于5′-末端标记的模板• 去除dNTP,净化PCR产物• 蛋白质的去磷酸化注意:通过在75℃温育2分钟,可以非常快速地灭活rAPid碱性磷酸酶。在限制性酶切和去磷酸化后不需要其他纯化步骤。去磷酸化的DNA可直接用于连接反应。注意:快速DNA去磷酸化和连接试剂盒也包含rAPid碱性磷酸酶,该试剂盒能够快速有效地完成去磷酸化并连接粘性或钝端DNA片段。使用这种方便的试剂盒,在+37 °C下可在10分钟内对钝端和粘性5′-突出末端进行去磷酸化,并在+15–25 °C下仅需5分钟即可内完成连接。
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