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北京鼎国昌盛
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染色1. 此实验步骤针对固定细胞β-gal表达的检测。这是用来确定转染效率的方便快捷的方法。此方法在6孔板上进行,由Sanes的方法修正而来。对于不同大小的培养器皿,根据培养板的表面积比来扩大或缩小溶液的量。此步骤可以用于悬浮细胞。使用2×106转染的细胞(来自6孔板转染),轻轻将细胞离心下来,使用和培养板上润洗细胞相同的方法。轻柔地处理细胞,不能振荡,并以尽可能低的速度离心。贮液:20mg/ml的X-gal溶解于二甲亚砜(-20℃,贮存于聚丙烯试管中,避光)。注意:用玻璃移液管或者聚丙烯吸头
轻触凝胶,检查是否成胶。 B-PEG细胞不可降解交联剂交联:混合液会持续液态10分钟之久,才会开始形成凝胶。开始成胶后,混合物就会变得不可抽吸。可利用这段时间将混合液转入合适的无菌培养皿*中,不过在胶凝开始前,需要混合或搅动来重悬细胞,确保细胞会悬浮在凝胶中。完成胶凝约需50分钟孵育时间。加入细胞培养基之前,可用吸头轻触凝胶,检查是否成胶。 * 培养器皿可选择多孔板(6、24、96孔)或任意的无菌培养板或培养瓶。推荐使用未经组织培养处理的聚苯乙烯。如需细胞成像,建议采用带细胞培养腔室的载玻片
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