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LIPOFECTAMINE 2000转染试剂转染步骤此实验步骤设计用来进行24孔板贴壁细胞的瞬时或稳定转染，其为设计用来在生长培养基中直接加入复合物。1. 转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90%。细胞铺板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。2. 对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.8μg-1.0μg DNA。多孔操作可以批量制备。3. 对于每孔细胞，使用50μl OPTI-MEMⅠ培养基稀释1μl-3μl
，将其包埋入基质胶中，此传代记为人肠道类器官的第0代（P0）。 ②基质胶凝固后，将悬浮球置于含L-谷氨酰胺、10μMHEPES、B-27补充剂及青霉素/链霉素的肠道类器官基础培养基中。用于肠道类器官扩增的培养基需添加生长因子（200-500ng/mLRspo1、40-100ng/mL头蛋白及100ng/mLEGF）。 注：Rspo1和头蛋白的浓度范围可根据靶细胞的多样性及研究目的进行调整。 ③每2-4天更换一次培养基。从第0代（P0）至第2代（P2），每日添加新鲜的1ng/mLIL-2处理培养物。 ④
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