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文献和实验童鞋们都知道,要想成为真正的 PCR 达人,并非易事。一个小小的环节都可能让整个实验挂掉,也正是因此,PCR 成为了资深科研者们心中的痛。 不要说实验本身,其实就连实验的耗材都隐藏着大学问,工欲善其事,必先利其器。 今天我们就具体来说下 PCR 耗材中选择选择反应板的问题。 PCR 板通常采用 96 孔和 384 孔的形式,其次为 24 孔和 48 孔。使用的 PCR 仪和正在进行的应用的性质将决定 PCR 板是否适合您的实验。 裙边 PCR 板的“裙”是板周围的板。裙边可为反应体系构建时
五左图),更换质量好的耗材后,荧光信号正常(图五右图); 图五:质量不好的耗材引起荧光值不稳定图及更换 Applied Biosystems™ 耗材后结果 如果使用的 PCR 反应板封膜质量不好,在 PCR 过程中受到水蒸气的影响,容易产生变形(图六),这样会引起「optical warping」,即「光学扭曲」现象(图七 左图),该实验中由于使用了 ROX 作为参比染料,ROX 有效的校正了这种荧光信号的变化,均一化的扩增图结果是正常的(图七 右图)。 图六:PCR 过程中水蒸气使得封膜变形
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