0.2 ml 和 0.5 ml 单个 PCR 管

单个细胞的PCR分析

和 探针以前已有报道。单个精子的分离与二倍体细胞的分离方法一样，精液经蔗糖梯度 离心得到纯化的精子，精子于－20℃可保藏8个月。显微镜下将单个精子吸入毛细塑 料针管内，然后转入试管内以作裂解。裂解的方法与发表的方法冲液(50mM KCL， 10mM Tris.HCL，pH8.3，2.5mM MgCl 2 ，0.1mg/ml明胶），0.05mg/ml蛋白酶K，20mM DTT和1.7μM SDS。37℃保温1小时，加入PCR反应物以前，样品加热到85℃。PCR扩 增。对80个精子

外周血单个核细胞（PBMC）分离方法及注意事项

核细胞分离开来。 Ficoll密度梯度离心法是分离、纯化PBMC最常用的方法。Ficoll是蔗糖的多聚体，中性，平均分子量400000，当密度为1.2g/mL，未超出正常生理性渗透压，也不穿过生物膜，故常用作PBMC分离的分离液。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分离液比重，离心后漂浮于分离液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分离液中。吸取分层液液面上的白膜层细胞，并进行适当的清洗，就可从外周血中分离到较高纯度的单个核细胞，即PBMC。 2    方法 1）  取新鲜抗凝

这几类 PCR 技术你知道吗？

transcription，RT）与 PCR，可用于检测单个细胞或少数细胞中少于 10 个拷贝的 RNA 模板。 RNA 扩增包括两个步骤： 在单引物的介导下和逆转录酶的催化下，合成 RNA 的互补 cDNA；加热后 cDNA 与 RNA 链解离，然后与另一引物退火，并由 DNA 聚合酶催化引物延伸生成双链靶 DNA， 最后扩增靶 DNA。 cDNA 第二链的合成方法有以下几种: 1、自身引导法： 合成的单链 cDNA 3' 端能够形成一短的发夹结构，这就为第二链的合成提供了现成的引物，当第一链合成反应