- ￥495
- Omega Biotek
- USA
- D6900-01
- 2025年11月03日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
长期
- 英文名：
M-13 Isolation Kit
- 库存：
现货
- 供应商：
上海伟进生物科技有限公司
- 保存条件：
常温
- 规格：
50T
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文献和实验我根据分子克隆上的经典方法提取M13噬菌体单链DNA，第一次就成功。但是随后几次，试剂和方法都一样，在可以看见噬菌体白色沉淀的基础上（量足够多），却怎么也提不出来，最后乙醇沉淀时，一片空白。请求各位大侠指点迷津。谢谢 ! 既然首先可以成功，说明方法肯定没问题。建议： 1、检查你的试剂有无污染； 2、操作有无问题（虽然可能性小，但有时很难想到的）； 3、也可以换用其他方法，做个对照。 推荐一个快速的用NaI法噬菌体DNA提取的方法，是NEB公司噬菌体展示
斑的方法是用Xgal蓝色噬菌斑试验。有些噬菌体载体的中间片段带有编码β半乳糖苷酸的基因。当这种噬菌体感染lac宿主细胞并在含有Xgal（5溴4氯3吲哚βD半乳糖苷）的培养基上生长时，半乳糖苷酸与Xgal反应的产物为不溶性的靛蓝染料。因此，含有中间片段的重新恢复的噬菌体形成蓝色噬菌斑；而同外源DNA连接的重组噬菌体形成的噬菌斑是无色透明的。 （二）单链噬菌体载体 最常用的单链噬菌体载体是M13和它的改建噬菌体。M13是丝状噬菌体，有长约6500个核苷酸的闭环DNA基因组。M13附着在大肠杆菌的F
个多克隆位点，多克隆位点处于表达LacZ基因产物-β-半乳糖苷酶的氨基端片段，用pUC质粒转化LacZ基因有突变的大肠杆菌株（M15）时，因为由质粒表达的α－肽补充了大肠杆菌却失的α－肽，所以恢复了分解半乳糖的能力。在加入IPTG和X-gal的培养基上，长出蓝色克隆。如果在多克隆位点内插入外源DNA，由于它破坏了α－肽的表达，因而在加入IPTG和X－gal的培养基，不能长出蓝色克隆，这就是所谓的蓝白筛选。 二、单链丝状噬菌体和噬粒 （一）大肠杆菌丝状噬菌体包括M13噬菌体f噬菌体等，其基因组均是单链闭环
