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100
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上海远慕生物
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500ml
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文献和实验相关专题 成功走出第一步：DNA提取 碱裂解法 大量提取质粒(500mL菌液) 1、取培养至对数生长后期(一般培养12～16小时)的含待提质粒的细菌 培养液于离心杯中，配平，4℃下4000rpm离心15min，弃上清，然后将离心管倒置于干净的约纸上使上清液全部流尽。 2、向盛有细菌 沉淀物的离心管中加入20mL冰冷的溶液Ⅰ，重悬沉淀(先加5mL溶液Ⅰ，用干净的玻璃棒搅拌均匀后，再加剩下的部分)。
加入1/10体积的ETR，颠倒7-10次后溶液变得浑浊，冰浴10-20min。 10. 42°C水浴5min后，25°C，3，000-5，000xg离心5min，ETR溶液将在管底形成蓝色分层。离心后，如果溶液中有大量的液滴悬浮，静置10分钟让液滴自然沉降。 11. 转移上清液移至离心管中，加入0.5倍体积无水乙醇(室温)，混匀后室温静置1-2min。 12. 将HiBind® 中量柱装在15ml收集管中。转移20ml混合液至柱子內，室温下3，000-5，000xg离心
液，上下颠倒充分混合，7500×g，4 ℃，离心 5 min，回收上层水相；5. 加入 1/10 倍体积的 65 ℃ 预热 CTAB/NaCl 溶液，上下颠倒混匀；6. 用等体积的氯仿/异戊醇抽提，混匀，离心，回收上层水相；7. 加入 1 倍体积的 CTAB 沉淀液，上下颠倒混匀，如果沉淀可见，继续做步骤 8，也可于 65 ℃ 温育 30 min；8. 500×g，4 ℃，(或约 2700 rpm) 离心 5 min；9. 移出上清，用高盐 TE 缓冲液重悬沉淀 (按每克起始材料加 0.5～1 mL
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