通用RT-PCR试剂盒(AMV)

通用 RT-PCR 试剂盒(AMV)
货号：RP1200
规格：50T/100T
保存：-20℃保存，避免反复冻融，复检期为 1 年。



产品内容：
试剂盒组成 50 次 100 次
AMV(10U/ul) 50ul 100ul
10×AMV Buffer 100ul 200ul
Oligo(dT) 16 (10uM) 100ul 200ul
DTT(200mM) 75ul 150ul
RNasin(40U/ul) 25ul 50ul
dNTPs(10mM) 100ul 200ul
Taq Polymerase(5U/ul) 25ul 50ul
10×PCR Buffer 250ul 500ul
MgCl 2 (25mM) 200ul 400ul
RNase-free ddH 2 O 1ml 2ml
说明书 1 份 1 份
产品简介：
本试剂盒适用于各种 RNA 制品的反转录反应以及随后的 PCR 扩增。它采用 AMV 进行反转录反应，
能够获得更长的反转录产物。同时，在 20ul 反转录体系和 50ul PCR 反应体系中，还可以一次性得到足够
量的 PCR 产物用于后续的克隆实验。
本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT 酶采用进口的 AMV，所以 cDNA 更长，基因的信息保留得更
完整！ 反转录过程中特异的 RNase 抑制剂可有效降低由于外源 RNase 污染而导致实验失败的风险。 本试剂
盒使用方便、快捷，可广泛用于 cDNA 克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
操作步骤：
一、反转录反应
1、在冰浴的无 RNase 的离心管中加入如下反应成分：
2-5ug 总 RNA 或 50-500ng mRNA
2ul Oligo(dT) 16 或 2 pmole基因特异性引物
补RNase-free ddH 2 O至 14.5ul
2、65℃保温 5min 后迅速在冰上冷却 2min，简短离心收集反应液后加入以下各组分：
2ul 10×AMV Buffer
1ul dNTPs
0.5ul RNasin
1ul AMV
1ul DTT
3、42℃温浴 60min，如果是用随机引物，请先将离心管置 25℃温浴 10min，再 42℃温浴 60min。
4、95℃加热 5min 终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃保存。
二、PCR 反应
1、按以下各组分配制 50ul PCR 反应体系：
10×PCR Buffer 5ul
MgCl 2 4ul
dNTPs 1ul
上游引物（用户自备 10um） 1ul
下游引物（用户自备 10um） 1ul
RT 反应产物 1-2ul
Taq Polymerase 0.5ul
ddH 2 O x ul
Total Volume 50ul
2、混匀后短暂离心，PCR 仪扩增，琼脂糖凝胶电泳观察结果。
注意事项：
1、 用于 cDNA 合成反应的相关试剂和耗材尽可能用 DEPC 进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不
能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。
2、 RNA 样品要避免反复多次冻融，应使 RNA 在冰浴中处于融化状态。
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