BeyoFC™ 7-AAD染色液(50X)

碧云天的BeyoFC™ 7-AAD染色液(50X)，英文名称为BeyoFC™ 7-AAD Staining Solution (50X)，是一种基于远红荧光探针7-AAD (7-aminoactinomycin D)特异性染色细胞膜丧失完整性的坏死细胞的特性，从而能够特异地对坏死细胞进行荧光染色、用于流式细胞术检测时染色和排除死细胞的远红荧光染色液。

7-AAD，英文全称为7-aminoactinomycin D，中文名称叫做7-氨基放 线菌素D，是一种能够嵌入核酸的荧光指示剂，形成的DNA复合物在546nm激发光下能够产生647nm的最大发射光，这一特性使其常用于多色荧光显微镜检测或流式细胞检测[1-2]。

7-AAD和碘化丙啶(PI)类似，是一种非细胞膜渗透性的荧光染料，不能穿过具有生物活性的细胞膜，因此被用来区分正常细胞与坏死细胞，也可以用于细胞固定或通透后的核酸染色。与碘化丙啶(PI)不同的是，被546nm的氩离子激光激发后，7-AAD的发射光谱较PI窄，且发射波长更长，对其它检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI的非常理想的替代品，可与多种488激发光激发的荧光染料联合使用，如FITC (异硫氰酸荧光素)、PE (藻红蛋白)、APC (别藻蓝蛋白)、Calcein AM等，在光谱的600nm左右有较弱的荧光，可用常规的荧光显微镜检测红色荧光，而在远红光650nm左右有较强的荧光，可用流式细胞仪FL3通道或配备650nm长通滤光片的荧光显微镜检测远红荧光。

7-AAD的分子式为C62H87N13O16，分子质量为1270.45，CAS number为7240-37-1。7-AAD与DNA结合后的最大激发光波长为546nm，最大发射光波长为647nm。7-AAD与DNA结合后的激发光与发射光光谱参考图1。

图1.7-AAD与DNA形成复合物后的激发光谱与发射光谱。

在流式细胞仪检测时，死细胞的存在可能会导致检测结果准确性降低。因为死细胞可能会与抗体发生非特异性结合，从而产生假阳性结果，并降低真实阳性信号的动态范围。同时，通常死细胞具有更高的自发荧光，且荧光信号分布广泛，这会导致较高的背景荧光，使对弱阳性样品及阳性比例较低样品的区分变得困难。常规操作中的离心、洗涤等步骤都会产生的少量死细胞，细胞活性较低的样品如非免疫组织细胞悬液、较长时间放置的血液样品等也会增加死细胞比例，因此流式实验中非常有必要通过7-AAD染色、PI染色等类似方法实现对于死细胞的荧光染色，以便于后续流式分析时排除死细胞。

本染色液已通过流式分析检测，可以简单便捷地进行细胞坏死检测，同时又不影响正常细胞的状态。使用本产品进行细胞坏死的流式细胞仪检测的效果请参考图2。

图2.碧云天BeyoFC™ 7-AAD染色液(50X) (C1737)用于坏死细胞流式检测的效果图。100万个小鼠脾脏细胞(分离后冰上保存约48小时)，用100µl BeyoFC™流式检测细胞染色缓冲液(C1711)重悬，加入2µl本产品并染色10分钟后进行流式检测。图中可见7-AAD染色组出现了远红荧光阳性的细胞群(7-AAD组)。Control组为不加7-AAD的阴性对照。实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

按照每100µl细胞重悬液使用2µl BeyoFC™ 7-AAD染色液(50X)进行检测，每1ml本产品可进行500次检测。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
C1737-1ml	BeyoFC™ 7-AAD染色液(50X)	1ml
C1737-5ml	BeyoFC™ 7-AAD染色液(50X)	5ml
—	说明书	1份

保存条件：

-20ºC避光保存，至少一年有效。

注意事项：

如果有细菌或真菌污染，可能会严重影响检测效果。

染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致坏死细胞的数量增加。

细胞经固定、通透和RNase处理后也可以使用7-AAD检测细胞周期，但更常用的是碘化丙啶(PI)。推荐使用碧云天的细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(C1052)、一步法细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(C1055)或BeyoFC™ PI/RNase即用型染色液(C7131)。

荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。