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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
999
- 英文名:
Cell lysis buffer for Western and IP with Inhibitors
- CAS号:
NONE20040
- 供应商:
上海麦克林生化科技股份有限公司
- 保存条件:
-20°C
- 规格:
100ml
商品名称: Western及IP细胞裂解液(含抑制剂)
商品中文名称: Western及IP细胞裂解液(含抑制剂)
商品英文名称: Cell lysis buffer for Western and IP with Inhibitors
商品CAS: NONE20040
商品型号: C718615
相关规格: 100ml
对应价格: 185
商品货期: 预计交期:8-10天
商品纯度: 澄清过滤
商品分子式: 无
商品分子量: 无
储存条件: -20°C
运输条件: 湿冰

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文献和实验获细胞,加入适量细胞裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上裂解 30 min,细胞裂解液于 4 ℃,最大转速离心 30 min 后取上清; 取少量裂解液以备 Western blot 分析,剩余裂解液加 1 μg 相应的抗体加入到细胞裂解液,4 ℃ 缓慢摇晃孵育过夜; 取 10 μl protein A 琼脂糖珠,用适量裂解缓冲液洗 3 次,每次 3 000 rpm,离心 3 min; 将预处理过的 10 μl protein A 琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中 4 ℃ 缓慢摇晃孵育
-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次(对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤)。 加入预冷的 RIPA 液(含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂),RIPA 液的用量:按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注:悬浮细胞,收集
或者互作蛋白复合物(红色+黄色)洗脱 Step 5:分析检测—Western Blot 或者质谱 常用“黑话” 以上示例图证明了 EDR1 和 EDR4 有相互作用。如果想要设计好实验,先清楚以下常用“黑话”含义。 阳性对照:证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白(IP)或者互作蛋白对(co-IP,比如诱饵蛋白X和靶蛋白 Y),即为常说的 input。可直接取抽好的蛋白溶液进行 Western。 阴性对照:用来排除假阳性。IP/co-IP 后靶蛋白或者互作蛋白对都检测到了,固然是值得高兴
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