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- thermofisher
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- 2026年09月27日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
Verso 1-步法 RT-qPCR 试剂盒，SYBR Green（含 ROX）
- 供应商：
合肥瑞辕生物科技有限公司
- 规格：
200reactions
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文献和实验曲线分析. 依据PDs 和扩增产物的熔解温度( Tm) 特点,在通用的三步法的延伸步骤之后,增加一个短暂的(5 s) 恒温和荧光检测步骤,使这个步骤的温度高于PDs 的Tm ,但低于扩增产物的Tm ,简称该法为四步法. PDs 的Tm 通常高于72 ℃,但低于扩增产物的Tm . 将四步法第四步的温度设置在高于PDs 的Tm ,但低于扩增产物的Tm 时,四步法能够有效地消除PDs 的影响. 对三步法和四步法SYBR green Ⅰ实时定量RT-PCR 进行了比较,发现三步法根本不能用于RNA 的实时定量,而四步法
REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度，需要摸索，从200nM到700nm等，设置不同浓度。3、每个引物浓度，从well 1到12设置4个样本，阳性cDNA 1和2，NTC以及H2O，做triplicate。4、若用ABI7000或7700，所有的PCR条件可设置成一致的，减少麻烦，当然，引物
Master Mix定量cDNA。由于配备了热启动DNA聚合酶，GoTaq® qPCR Master Mix在使用实时PCR仪器的标准或快速模式时，都能获得特异、灵敏和高效的最佳qPCR重复结果。GoTaq® qPCR Master Mix含有BRYT™ GREEN染料，是SYBR® Green I染料亮度的两倍。这两个步骤的卓越性能使研究者能在更宽的线性范围内观察到更早的定量循环值（quantification cycle value）。 GoTaq®两步法RT-qPCR系统是一种
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