MM.1S（人骨髓瘤细胞）

人骨髓瘤细胞MM.1S

细胞详情
细胞名称	人骨髓瘤细胞MM.1S
货 号	HZ-5076HC
组织来源	42岁黑人女性，外周血；免疫球蛋白A型lambda骨髓瘤
细胞类型	B淋巴细胞母细胞
生长方式	悬浮生长
描 述	人骨髓瘤细胞，是从一名对类固醇类药物治疗产生耐药性的多发性骨髓瘤患者的外周血中建立的，对地塞米松敏感。该细胞同时存在悬浮生长和轻微贴壁两种状态。冻存管细胞复苏后存活率约50%，需培养2周左右才能恢复生长。
培养条件	1640，10%FBS；空气95%，二氧化碳5%；37℃培养
换液频率	半换液法，直接补充新鲜培养基
传代周期	细胞密度不宜超过3×106细胞/ml
传代比例	接种细胞密度在3-4×105细胞/ml
冻存液配方	基础培养基+8%DMSO+20%FBS
安全性	BSL-1
供应限制	仅供研究之用。

细胞操作详细步骤----贴壁细胞

1.细胞复苏

1.1准备一个T25的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支15ml离心管，离心管中加入4-5ml细胞完全培养基。

1.2取出细胞冻存管，在37度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。

1.3将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，1000转离心5分钟。

1.4倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。

1.5将重悬好的细胞转移到T25细胞培养瓶，补充培养基到8ml左右，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养。

2.细胞传代

2.1准备细胞完全培养基，细胞培养瓶，胰酶（0.05%Trypsin-0.01mM EDTA），DPBS。

2.2弃上清，并加2-3mlDPBS轻柔冲洗培养瓶内细胞1-2次。

2.3加入1ml胰酶，室温或者37度消化，直到细胞成片脱落，加入终止液终止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。（注意：消化时间与所用胰酶效价，消化时候细胞密度以及温度等因素有关，建议第一次消化时候，多在显微镜下观察，以找到最佳消化时间）

2.4收集细胞悬液，1000转离心5分钟，弃上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。

2.5将重悬好的细胞按比例分装至T25细胞培养瓶，补充培养基到8ml左右，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养。

3.细胞冻存

3.1准备细胞冻存液，细胞冻存管，胰酶（0.05%Trypsin-0.01mM EDTA），DPBS。

3.2弃上清，并加2-3mlDPBS轻柔冲洗培养瓶内细胞1-2次。

3.3加入1ml胰酶，室温或者37度消化，直到细胞成片脱落，加入终止液终止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。

3.4收集细胞悬液，1000转离心5分钟，弃上清。

3.5加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度0.5-0.8×10⁶细胞/ml。

3.6将冻存管放入程序降温盒，并放到-80℃冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。

4.注意事项

4.1建议收到细胞后先用我们配套的培养基和血清。收到活细胞的客户培养瓶中的培养基可回收使用，保存在4度可使用一周。

4.2不同实验室操作上会有些许差异，为了避免细胞不适应，请先按照说明书推荐的方法和操作步骤培养，待细胞冻存后可根据自己的习惯操作看细胞是否能够适应。

4.3建议收到细胞后，前几代及时冻存一些细胞，并最好是可以多冻存几个批次。

4.4 终止消化时候用专门的胰酶终止液或者用其他含有10%血清的培养基，如DMEM或者1640

4.5 消化时候常规的0.25%胰酶需要稀释5倍后使用。