鸡非酯化脂肪酸（NEFA）ELISA检测试剂盒

鸡非酯化脂肪酸（NEFA）ELISA检测试剂盒

英文名称：Chicken Non‑Esterified Fatty Acid (NEFA) ELISA Kit
仅限科研使用，不可用于临床诊断

基本信息
检测方法：夹心法
规格：48T / 96T
保存条件：2‑8℃避光保存，禁止冷冻
有效期：6 个月
总实验时长：约 2.5‑3h

检测原理
微孔板预包被 NEFA 抗原；样本中 NEFA 与包被抗原竞争结合有限量 HRP 标记抗‑NEFA 抗体。
样本中 NEFA 浓度越高，结合到板上的酶标抗体越少，显色越浅；TMB 底物显色，加终止液变黄；OD 值与样本 NEFA 浓度呈**负相关**，通过标准曲线计算样本浓度。

适用样本类型
- 鸡血清、血浆
- 组织匀浆、细胞培养上清、体液样本

试剂盒主要组分
1. 预包被微孔板（可拆卸板条）
2. NEFA 标准品（冻干粉）
3. 标准品稀释液、样本稀释液
4. HRP‑NEFA 结合工作液
5. 20× 浓缩洗涤液
6. TMB 显色底物液
7. 终止液（2M H₂SO₄）
8. 封板膜、说明书

简要操作流程
1. 试剂盒室温平衡 20min；浓缩洗涤液按 1:20 用蒸馏水稀释；取出需要板条，剩余密封 2‑8℃保存。
2. 设置标准孔、样本孔、空白孔；标准品梯度稀释，每孔加入 50μL 标准品 / 待测样本。
3. 除空白孔，每孔加入 HRP 标记结合液 50μL；封板膜密封，37℃孵育 60min。
4. 弃液，洗板 3‑5 次，拍干。
5. 每孔加入 TMB 底物 100μL，37℃避光显色 10‑15min。
6. 加入终止液 50μL 终止反应；5min 内酶标仪读取 450nm OD 值。
7. 标准曲线拟合，计算样本浓度，乘以样本稀释倍数得到最终结果。

样本要求
1. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
2. 不能检测含NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。