猪（Porcine）黑色素瘤相关抗原(MAGE)ELISA检

猪（Porcine）黑色素瘤相关抗原(MAGE)ELISA检测试剂盒

产品货号：DM-P6398

产品规格：48/96T

上海笃生物科技有限公司坚持技术为本、品质先行。试剂盒依托经典酶联免疫吸附实验原理搭建体系，持续优化抗体配对与反应缓冲体系，降低非特异性干扰；企业恪守标准化生产与多重出厂检测原则，兼顾技术创新与实验实用性，持续为高校实验室、科研平台提供可靠的蛋白定量检测工具。

 

 

ELISA 依托抗原与抗体特异性免疫结合，结合酶的高效催化显色反应实现定量检测。双抗体夹心法使用两种识别抗原不同表位的配对抗体，微孔板预包被捕获抗体，结合样本中的靶抗原，再与生物素标记检测抗体形成夹心免疫复合物；HRP 标记链霉亲和素特异性结合生物素，将辣根过氧化物酶富集于复合物上；HRP 催化 TMB 底物显色，抗原含量越高颜色越深；酶标仪测定吸光度，结合标准曲线，完成靶抗原定量。

ELISA试剂盒的四大原理

试剂盒组成

ELISA试剂盒标准操作流程（双抗体夹心为列）

ELISA 核心原理基于抗原与抗体的特异性结合以及酶高效催化显色反应，双抗体夹心 ELISA 采用一对识别抗原不同位点的配对抗体，预包被在微孔板内的捕获抗体结合样本中的靶抗原，再与生物素化检测抗体形成夹心复合物，通过 HRP 标记链霉亲和素结合生物素完成信号标记，HRP 催化 TMB 底物产生显色反应，抗原浓度越高显色越深，酶标仪测定吸光度值，结合标准曲线即可实现靶抗原定量检测。

 

样本前处理

ELISA 样本前处理需根据样本类型开展操作，血清样本采集后室温静置充分凝血，离心

分离上清避免溶血、脂血与黄疸干扰；血浆样本选用适配抗凝剂，防止抗凝成分影响抗原抗体反应；细胞上清、组织匀浆样本收集后高速离心去除细胞碎片与杂质，所有样本及时分装，短期保存置于 2～8℃，长期存放需 - 20℃或 - 80℃冷冻，避免反复冻融，必要时按照试剂盒说明书进行样本稀释、中和预处理，全程规范操作减少蛋白降解、非特异性结合，降低基质效应，保障后续 ELISA 检测结果准确可靠。

加样与孵育

加样是按照实验排布依次向微孔板加入标准品与待测样本，保证加样速度、体积统一，减少操作误差，孵育过程为抗原与固相捕获抗体提供适宜温度与充足反应时间，促进二者发生特异性结合，孵育环境保持稳定，避免液体蒸发影响体系浓度，反应结束后通过洗板去除未结合的游离物质，减少非特异性吸附，为后续免疫反应奠定基础。

 

洗板（核心关键步骤）：

洗板是 ELISA 每一轮免疫孵育之后必不可少的关键操作。常规循环洗涤 4～5 次。单次洗涤只能去除一部分杂质，多次洗涤逐步降低孔内游离试剂浓度，达到理想洗涤效果。微孔板内发生抗原抗体特异性结合，但体系里还残留大量未结合的抗原、游离抗体、杂蛋白、非特异性吸附杂质。 洗板就是利用洗涤缓冲液冲洗、解离这类松散结合物质，只保留牢固结合在孔壁上的免疫复合物，最大限度降低背景信号，减少假阳性、缩小复孔误差，直接决定实验数据干净程度。

 

加酶结合物与二次孵育

在完成样本孵育、洗板、加入生物素化检测抗体并充分洗涤后，微孔板内已经形成「捕获抗体—靶标抗原—生物素化检测抗体」夹心复合物。

 

二次洗板

二次洗板是酶结合物孵育结束后的关键净化步骤，主要用于彻底洗脱微孔内未成功结合生物素的游离 HRP 酶标试剂、残留杂蛋白与反应体系杂质，杜绝游离酶残留引发的非特异性底物催化反应，有效降低实验背景干扰、规避假阳性结果。规范操作下全程洗涤 5 次，每次加入洗涤液充分浸润孔底与孔壁 30 秒，使残留杂质充分溶解洗脱，随后彻底弃液、吸水纸拍干孔内残留液体，避免稀释后续底物试剂、破坏反应体系平衡，精准保障后续显色强度仅与特异性结合的夹心免疫复合物数量成正比，大幅提升 ELISA 检测的精准度与重复性。

 

底物显色

底物显色推荐恒温 37℃避光孵育，该温度契合 HRP 酶最佳活性区间，保障显色速率稳定、整板反应均一。温度波动会直接改变酶促反应速度，引发显色深浅失衡，影响定量准确性。

终止反应与读数

加入终止液可以快速改变反应体系酸碱度，直接抑制 HRP 酶活性，立刻终止酶促显色反应，孔内蓝色产物随之转变为稳定的黄色，保证各孔显色程度不再发生变化，消除因显色时长差异带来的误差；终止完成后需在规定时间内使用酶标仪检测吸光度，选择 450nm 为主检测波长，可搭配 630nm 参考波长校正孔板背景与光学干扰，读取的 OD 值将用于构建标准曲线，进而换算出样本中靶抗原浓度。

 

数据处理

标准品是已知一系列梯度浓度的抗原，在同一板、相同反应条件下测得对应的 OD 值。利用标准品「浓度 —OD 值」对应关系建立数学模型，绘制标准曲线，再将样本 OD 值代入公式，反推出样本中待测物浓度，这就是 ELISA 定量的核心数据处理思路。

 

 

ELISA试剂盒核心性能评价指标

1.灵敏度（最低检测限）：试剂盒能够稳定检出的最低抗原浓度，数值越低代表试剂盒检测微量样本的能力越强。

2.线性范围：检测信号与抗原浓度保持良好线性对应的浓度区间，区间越宽，可直接检测的样本浓度范围越大，减少多次稀释操作。

3.准确度（回收率）：通过加标回收试验验证，实测浓度和理论浓度的吻合程度，反映检测结果贴近真实值的水平。

4.精密度：分为板内精密度与板间精密度，用变异系数 CV 表示，体现同一标本多次检测结果的重复性，变异系数越小，实验稳定性越好。

5.特异性：评估试剂盒与同源类似物质发生交叉反应的程度，交叉反应越低，越不容易出现假阳性。

6.稳定性：包含储存稳定性、开瓶稳定性、热加速稳定性，考察试剂在规定储存条件下性能维持不变的时长。

7.平行性：高浓度样本梯度稀释后，稀释样本曲线与标准曲线趋势保持一致，证明样本基质不会明显干扰检测。

结果计算

读取酶标仪 OD 数值；采用双波长检测时，净 OD=OD450−OD630，消除微孔板划痕、杂质干扰。

标准品、待测样本均设置复孔，计算每组复孔 OD 平均值；计算复孔变异系数 CV，CV 过大说明操作误差大，数据议剔除或复测。

背景校正：所有标准品、样本平均 OD 减去空白孔平均 OD，得到校正净 OD 值，消除非特异性吸附背景干扰。

（此图仅供参考）

 

企业介绍：

上海笃玛生物科技有限公司是一家从事生物学试剂及试剂盒的高科技生物企业总部位于上海，并在全国设有经销或代理机构。产品因可靠而稳定的质量和较为完善的售后服务确立了“笃玛生物”良好的品牌形象。公司秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念，拥有专业的研发和质量检测团队以及先进的仓储和物流系统。“笃玛生物”已经得到全国科研工作者的认可。公司拥有一批专业的研发人员，我们专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广，品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时，提供各种常规生化试剂，库存常备产品多达10000多种，可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面，谨记公司信念：质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程，科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序，我们恪守对每一位用户的承诺：用专业的态度做专业的品牌。同时，公司组建了一支专业的技术服务队伍，能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买笃玛生物产品的用户都能够得到专业的咨询和完善的售后服务。