中压特制玻璃层析柱柱内压可增加 (5bar～7bar) 50

层析柱的概念及其作用原理

，不留死体积，密封后用柱塞式计量溶剂泵按丙酮一石油醚(5：95)比例泵人溶剂，至溶剂流出止。 2 上样 将冬凌草的乙醇提取物400G用适量丙酮溶解，泵人中压柱柱头，然后泵人石油醚1000RID。 3 洗脱 以一定比例的石油醚一丙酮为洗脱液，60ML/MIN的流速进行梯度洗脱，柱的使用压力为2～ 3KG/C 。按每份500ML收集，TLC检识展开剂丙酮一氯仿(2：8)，显色剂5%香草醛浓硫酸乙醇液 至洗脱完全，相同流份合并，回收溶剂。将冬凌草

做好抗体标记，这4种方法你都用对了吗？

的比率，罗丹明的测量波长在 550nm 和 280nm 。荧光素的吸光值比例（ 496nm/280nm ）应在 0.3 ～ 1.0 之间，罗丹明的吸光值比率（ 550nm/280nm ）在 0.3 ～ 0.7 之间。低于上述比率将导致低信号，高比率则出现高背景。若比率太低，应使用低浓度抗体与高浓度染料重复结合；若比率太高，则可适当调整后重新标记，或通过 DEAE 离子交换层析柱进一步纯化抗体。用 10mmol/L 磷酸钾（ pH8.0 ）平衡并灌注滤柱，通过增加盐浓度进行梯度洗脱。测量每一组分的吸光

抗体纯化：deae-sephadex a-50 柱层析法

于滴定架上，柱底垫一圆形尼龙纱，出水口接一乳胶或塑料管并关闭开关。②将0.1mol/l ，pH7.4PB沿玻璃棒倒入柱中至1/4高度，再倒入经预处理并以同上缓冲液调成稀糊状的a-50。等a-50。等a-50凝胶沉降2～3cm高时，开启出水口螺旋夹，控制流速1ml/min，同时连续倒入糊状a-50凝胶至所需高度。③关闭出水口，待a-50凝胶完全沉降后，柱面放一圆形滤纸片，以橡皮塞塞紧柱上口。通过插入橡皮塞之针头及所连接的乳胶或塑料管与洗脱液瓶相连接。（3）平衡启开出水口螺旋夹，控制流速12～14滴