大鼠沙漠刺猬因（DHH）ELISA检测试剂盒

大鼠沙漠刺猬因（DHH）ELISA检测试剂盒

基本信息
产品名称：大鼠沙漠刺猬因（DHH）ELISA检测试剂盒
常用规格：48T/96T
检测方法：双抗体夹心 ELISA
适用样本：血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等
储存条件：2–8℃，有效期 6 个月；避免反复冻融
用途：仅科研，不可临床诊断

试剂盒组分（96T）
预包被酶标板：96 孔（可拆）
标准品（冻干）：2 瓶（最高浓度 10 ng/mL）
生物素化抗体（100× 浓缩）：1 支
HRP - 链霉亲和素（SABC，100× 浓缩）：1 支
TMB 显色液：A 液、B 液各 1 瓶
终止液（2 M H₂SO₄）：1 瓶
浓缩洗涤液（25×）：1 瓶
标准品 / 样本稀释液：1 瓶
说明书、封板膜

实验原理
微孔板预包被抗大鼠 DHH 单克隆抗体；
加入标准品 / 样本，DHH 与包被抗体结合；
洗板后加入生物素化抗 DHH 抗体，形成 “包被抗体–DHH–生物素抗体” 复合物；
加入HRP - 链霉亲和素，与生物素结合；
加 TMB 底物显色，蓝色；加终止液变黄色；
450 nm 测 OD 值，OD 值与 DHH 浓度正相关，标准曲线定量。

操作要点
试剂平衡：所有试剂室温（20–25℃）平衡 30 min；
标准品稀释：倍比稀释成 7 个浓度梯度 + 空白对照；
加样：标准品 / 样本各 100 μL，37℃孵育 60 min；
洗板：弃液，洗板 5 次，拍干；
加生物素抗体：100 μL / 孔，37℃孵育 60 min；
洗板：同上；
加 SABC：100 μL / 孔，37℃孵育 30 min；
洗板：同上；
显色：TMB A、B 液 1:1 混合，100 μL / 孔，37℃避光 15 min；
终止：50 μL 终止液，轻晃混匀；
读数：15 min 内 450 nm 测 OD 值。

样本处理
血清：室温凝血 2 h 或 4℃过夜，1000×g 离心 10 min，取上清；
血浆：EDTA / 肝素抗凝，4℃ 1000×g 离心 15 min；
细胞上清：4℃ 1000×g 离心 20 min，取上清；
组织匀浆：预冷 PBS（pH7.4）制备 10% 匀浆，4℃ 12000×g 离心 15 min，取上清。

注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。