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手把手教你利用 CRISPR-Cas9 系统精准敲除靶标基因

一、CRISPR-Cas 系统简介图 1 CRISPR-Cas9 系统介绍CRISPR-Cas9 系统是一种被广泛运用的基因组编辑工具，它来源于细菌的适应性免疫系统。CRISPR-Cas9 系统包括：Cas9 酶和一个向导 RNA。 向导 RNA 作用是引导 cas9 到基因组的特异性位点上切割。如图 1 所示。目前为止，CRISPR-Cas9 系统主要有两方面应用: 基因敲除和基因敲入。基因敲除时, 一旦 DNA 的双链断裂反应（DSB）被 Cas9 切割诱导发生, 细胞会启动 NHEJ

张峰手稿：基因工程技术之CRISPR-Cas9

最近，随着基因编辑技术不断曝光，这项技术也越来越火，越来越受到关注，但大部分媒体都只是浅尝辄止进行宣传而已，实质性的怎么操作，具体的步骤却很少涉及。鉴于此，师兄就把张峰的手稿扒拉出来，分享给大家。同时也欢迎大家与我探讨，我的微信号;shixiongcoming，向我申请的时候注意，写上你的理由哦，最近加我的人太多，不注明来由的读者，别怪师兄拒绝你呦。   Genome Engineering Using CRISPR-Cas9 System Le Cong

CRISPR_Cas9基因敲除的原理是什么

隆？ 只要结论依赖"该基因完全缺失"，就必须做。药物靶点验证、关键通路上下游关系、需要长期传代的稳定株，都属于这一类。仅做初步表型探索、且池化移码效率已超过 90% 时，才可以用池化细胞做短期实验。 敲除和敲低（RNAi）应该选哪个？ 取决于基因是否必需、以及是否需要完全清除蛋白。详见《什么情况下该做 KO，什么情况下只能做 KD》一篇。 --- 总结 CRISPR/Cas9 敲除的原理不是"切一刀就结束"，而是Cas9 制造断裂、细胞修复产生 indel、移码触发 NMD、蛋白随半衰期降解这条完整链条