小鼠（Mouse）己糖激酶1（HK1）ELISA检测试剂盒

小鼠（Mouse）己糖激酶1（HK1）ELISA检测试剂盒

 

产品货号：DM-K510

产品规格：48/96T

上海笃玛生物科技有限公司是专注于生命科学领域的高科技企业，秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念，致力于为全球科研工作者提供高质量的生物学试剂及解决方案。本试剂盒是公司核心产品线之一，采用自主研发的高特异性抗体对，基于经典的双抗体夹心法原理构建，可精准定量检测样本中的含量。

 

ELISA（酶联免疫吸附测定，Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）的核心原理是：抗原与抗体的特异性免疫反应 + 酶催化底物的化学显色反应，通过颜色深浅定量 / 定性判断样本中待测物浓度。

试剂盒的组成

 

ELISA 试剂盒标准操作流程（双抗体夹心法为例）

所有操作需严格遵循试剂盒说明书，以下为通用标准化流程，含核心操作要点：

实验前准备

提前 1 小时将试剂盒所有组分从冰箱取出，室温（20-25℃）避光平衡至室温，酶结合物、标准品需避免阳光直射，冻干标准品需按说明书精准复溶、静置。

提前开启酶标仪、洗板机，完成校准；配制工作液：浓缩洗涤液用纯水稀释至工作浓度，底物 A/B 液按 1:1 比例临用前新鲜混合。

确定实验布局，提前规划标准品梯度、空白对照、阴性对照、样本重复孔的位置，避免加样错误。

样本前处理

血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等样本，需按说明书要求离心、稀释，去除沉淀、脂质、溶血杂质，降低基质效应；待测浓度超出线性范围的样本，需用样本稀释液梯度稀释后再检测。

加样与孵育

按布局，向对应孔中加入标准品梯度液、待测样本、对照品，每孔加样体积精准一致，加样时避免枪头触碰孔壁、产生气泡，加样完成后用封板膜严密封口。

按说明书要求，37℃恒温避光孵育，孵育时间严格遵守说明书，不可随意延长或缩短，孵育时避免封板膜翘起、液体蒸发。

洗板（核心关键步骤）

孵育结束后，快速甩去孔内液体，在吸水纸上彻底拍干残留液体，按说明书要求用洗涤液洗板 3-6 次，每次洗板需注满孔、静置 30 秒后甩干，确保洗板充分，去除未结合的游离物质。

洗板不彻底会导致本底飙升、结果偏差，洗板过度会导致复合物脱落、信号偏低。

加酶结合物与二次孵育

每孔加入精准体积的酶结合物工作液，封板膜密封后，按说明书 37℃恒温避光孵育，严格控制孵育时间。

二次洗板

重复洗板操作，洗板次数、参数严格按说明书执行，洗板完成后彻底拍干孔内残留液体，无可见液滴。

底物显色

每孔加入新鲜混合的底物工作液，轻轻混匀后，37℃恒温避光孵育显色，严格控制显色时间，显色过程需避光，避免强光导致底物自发显色、本底升高。

终止反应与读数

按顺序每孔加入终止液，轻轻混匀后，蓝色产物会立即变为黄色，终止后 10-30 分钟内，用酶标仪读取 450nm 处的 OD 值，必要时设置参比波长 630nm，降低孔间误差。

数据处理

以标准品浓度为横坐标，对应 OD 值为纵坐标，拟合四参数 Logistic 曲线（优先选择）或线性回归曲线，根据样本 OD 值，计算出样本中待测靶标的浓度，结合稀释倍数换算最终结果。

 

ELISA 试剂盒核心性能评价指标

这是判断试剂盒质量、是否满足实验要求的核心标准，也是试剂盒研发、稳定性验证的核心依据，呼应你之前关注的加速稳定性实验：

灵敏度：分为最低检出限（LOD）和定量下限（LLOQ），LOD 是可检出靶标的最低浓度，LLOQ 是可精准定量的最低浓度，数值越低，试剂盒的检测能力越强。

特异性：通过交叉反应率评估，试剂盒与靶标结构类似物的交叉反应率越低，特异性越强，检测结果越准确，无假阳性干扰。

精密度：用变异系数（CV）评估，分为板内精密度（同一块板同一样本重复孔 CV≤10%）、板间精密度（同批次不同板同一样本 CV≤15%）、批间精密度（不同批次试剂盒同一样本 CV≤20%），CV 越低，重复性越好。

准确度：用加标回收率评估，向空白基质中加入已知浓度的标准品，检测回收率需在 80%-120% 之间，越接近 100%，定量准确性越高。

线性范围：试剂盒可精准定量的靶标浓度区间，实验中样本浓度需落在该区间内，超出范围需稀释后检测。

稳定性：是试剂盒有效期标定的核心，分为 4 类，也是你之前关注的加速稳定性实验的核心应用场景：

实时稳定性：试剂盒在规定保存条件下，长期存放的性能稳定性，是有效期标定的金标准。

加速稳定性：37℃恒温放置 7-14 天，模拟长期保存的老化效果，快速预判试剂盒有效期。

开瓶稳定性：试剂盒开封后，按规定条件存放的性能稳定性，指导开封后的使用时限。

运输稳定性：模拟运输过程中的温度波动、震动等条件，验证试剂盒的运输耐受性。

 

结果计算

1. 首先计算每个标准品、空白孔及样本孔的平均OD值（复孔检测时），空白孔OD值作为阴性对照，用于扣除背景干扰。

2. 以标准品浓度为横坐标（X轴，对数坐标），对应的OD值为纵坐标（Y轴，线性坐标），使用专业绘图软件（如Excel、GraphPad Prism）绘制标准曲线，计算回归方程（R²值应≥0.99，确保标准曲线的可靠性）。

3. 将扣除背景后的样本OD值代入回归方程，计算出样本中[检测指标]的初步浓度，再根据样本的稀释倍数计算出样本的实际浓度。

售后服务

上海笃玛生物科技有限公司拥有专业的技术服务团队，为您提供全程技术支持。如您在产品使用过程中有任何疑问，或对产品质量有异议，请及时联系我们的技术顾问，我们将在24小时内响应，为您提供实验方案优化、问题排查等专业服务。