副流感病毒5型（PIV5）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

副流感病毒5型（PIV5）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

产品基本信息
产品名称：副流感病毒5型（PIV5）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）
英文名称：Parainfluenza Virus Type 5 (PIV5) Nucleic Acid Detection Kit (Fluorescence PCR Method)
检测方法：实时荧光定量 RT-PCR（分染料法与探针法）
规格：50 测试 / 盒
适用样本：咽拭子、鼻拭子、肺组织、细胞培养上清液等
适用仪器：ABI 7500/7300、Bio-Rad CFX96、罗氏 LightCycler 480 等实时荧光 PCR 仪
储存条件：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融
有效期：12 个月
用途：仅供科研使用，不用于临床诊断

检测原理
针对 PIV5 基因组中高度保守的 L 基因或 HN 基因设计特异性引物与荧光探针（或染料），采用一步法 RT-PCR技术，在同一反应管内完成反转录与 PCR 扩增：
探针法（TaqMan）：探针与模板结合后被 Taq 酶 5'-3' 外切酶活性切割，报告荧光基团（如 FAM）与淬灭基团分离，荧光信号随扩增呈指数增长。
染料法（SYBR Green）：染料与双链 DNA 结合后发出荧光，实时监测扩增产物总量。
内标质控：含外源内标或宿主基因（如 16S rRNA），监控提取与扩增过程，避免假阴性。

试剂盒组分（50 测试 / 盒）
2×RT-PCR 缓冲液：含 dNTPs、Mg²⁺、缓冲剂（500μL，棕色管）
10×RT-PCR 酶混合液：含 Taq 酶、逆转录酶、UNG 酶（100μL，红盖）
PIV5 引物 / 探针混合液：特异性引物与 FAM 标记探针（100μL，白盖）
阳性对照：PIV5 体外转录 RNA（100μL）
阴性对照：无酶水（1mL）
ROX 染料（可选）：用于仪器荧光校正（20μL）

性能指标
灵敏度：最低检测限 **≤100 拷贝 / 反应 **（探针法）；染料法约1000 拷贝 / 反应。
特异性：与 PIV1/2/3/4 型、流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等无交叉反应。
精密度：批内 / 批间变异系数（CV）≤5%。
扩增效率：90%–110%，标准曲线 R²≥0.99。

操作流程（20μL 体系）
核酸提取：取 200μL 样本，提取总 RNA，洗脱至 50μL。
反应体系配制（冰上操作）：
2×RT-PCR 缓冲液：10μL
10× 酶混合液：2μL
引物 / 探针混合液：2μL
模板 RNA：4μL
无酶水：2μL
扩增程序：
反转录：45℃，10min
预变性：95℃，2min
循环（40 次）：95℃ 5sec → 55℃ 20sec（收集 FAM 荧光）
结果判读：
阳性：扩增曲线呈典型 S 型，Ct 值≤38
阴性：无扩增曲线或 Ct 值 > 38
无效：阴性对照出现扩增或阳性对照无扩增

产品特点
高特异性：靶向 PIV5 保守区，无交叉反应。
高灵敏度：可检测极低浓度病毒核酸。
一步法：单管完成反转录与扩增，防污染、操作简便。
内控完善：内置内标，杜绝假阴性。
快速高效：全程约1.5 小时，适配高通量检测。

注意事项
严格分区操作（试剂配制区、样本处理区、扩增区），防止交叉污染。
试剂融化后充分混匀，避免酶活性损失。
阳性对照需单独存放，防止污染其他试剂。
结果仅用于科研，不可作为临床诊断依据。