多轮 IF多标扫描融合 多重荧光服务

一、服务简介

技术痛点与方案原理

二、服务核心优势

1. 单张切片可采集多种目标组分荧光信号，有效规避荧光淬灭、多荧光染料相互串色的问题；
2. 配套 TSA 信号放大技术，放大阳性信号，检测灵敏度更高，同源、异源一抗均可适配开展实验；
3. 高分辨率全景成像，以 DAPI 信号作为对齐基准，采用 0.5 像素高精度重合算法匹配各轮扫描画面，融合图像对位精准、数据完整；
4. 配备轻量化图像浏览分析软件，普通办公电脑即可读取全景图像文件，一键输出共定位细胞数量、阳性比率、细胞密度等量化参数，无需高端服务器硬件支撑。

三、完整标准实验流程

1. 样本准备
2. 抗原修复处理
3. 专用荧光淬灭设备去除甲醛、红细胞产生的背景自发荧光
4. 内源性过氧化物酶封闭处理
5. 血清封闭
6. 第一种一抗孵育
7. HRP 标记二抗孵育
8. iF488-TSA 荧光标记
9. 抗体洗脱液洗脱本轮一抗、二抗
10. 循环执行血清封闭、一抗孵育、HRP 二抗、TSA 标记、抗体洗脱整套流程，依次完成第二至第五种靶蛋白染色；每轮染色后均执行 DAPI 复染、封片、全景扫描、清除荧光基团操作
11. DAPI 复染细胞核并封片
12. 高清全景扫描，支持外源荧光、内源荧光、凋亡 Tunel、核酸 FISH、荧光染料多种类型样本成像采集
13. 去除盖玻片，抗体洗脱液清洗切片
14. 荧光去除设备清除切片残留荧光基团
15. 全部轮次扫描图像统一进行高精度融合处理

四、样本适配与送样运输规范

1. 石蜡切片常温保存运输；冰冻切片 - 20℃保存运输。
2. 细胞爬片、细胞滴片、细胞涂片不适用本方案：拆除盖玻片易造成细胞脱落，多轮扫描无法保证视野完全重合，图像无法正常融合。
3. 实验全程切片组织形态结构必须保持一致，否则各轮扫描图像无法匹配融合。

五、交付成果