- ￥1100
- 免疫荧光 5 标 6 色（切片） 多通道切片全景成像阳性定量分析服务
- 全国
- 2026年07月06日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海经科化学科技有限公司
- 服务名称：
免疫荧光5标6色多重免疫荧光实验 多轮靶标染色方案 切片多指标联合检测科研染色服务
- 规格：
张
一、服务简介
TSA 技术原理
二、整体实验流程
三、详细分步实验操作
- 石蜡切片脱蜡至水
切片依次放入三类脱蜡液各浸泡 10min，再经梯度无水乙醇清洗，最后蒸馏水漂洗干净。
- 抗原修复
切片放入抗原修复盒微波加热，缓冲液维持沸腾 10min，避免缓冲液蒸发干片；自然冷却后 PBS 摇床洗涤 3 次，每次 5min，可选用柠檬酸、EDTA 修复缓冲液，优先柠檬酸修复液。
- 双O水封闭
免疫组化笔沿组织边缘划线，滴加 3% 双O水溶液避光孵育 25min 封闭内源过氧化物酶，完成后 PBS 充分洗涤。
- 血清封闭
室温封闭 30min；一抗为山羊来源采用兔血清封闭，其余类型一抗使用 BSA 封闭。
- 五轮循环标记流程
每轮统一操作：稀释一抗 4℃湿盒过夜孵育→PBS 多次洗涤→室温孵育 HRP 二抗→避光孵育对应 TSA 染料 10min，TBST 洗涤；单轮结束后执行抗体洗脱，再次封闭后开展下一轮染色。抗体洗脱操作：洗脱液铺满组织室温孵 5min，再加足量洗脱液 37℃孵育 30min，TBST 清洗。五轮依次使用 iF440、iF488、iF546、iF594、iF700 型号 TSA。
- 细胞核复染
避光滴加 DAPI 染液孵育 10min，PBS 充分清洗切片。
- 自发荧光淬灭
加入自发荧光淬灭剂处理 5min，流水冲洗 10min。
- 封片与全景扫描
PBS 洗涤后使用抗荧光淬灭封片剂封片，上机完成切片全景扫描，可匹配对应激发发射波长的荧光滤片采集图像。
四、送样运输要求
- 石蜡切片常温保存运输；冰冻切片 - 20℃保存运输。
- 细胞爬片经 PFA 固定 15min，无菌 PBS 洗涤浸泡，搭配冰袋 4℃低温运输。
五、荧光配套体系
六、交付成果
免疫荧光双标三色（切片）
免疫荧光3标4色（切片）
免疫荧光4标5色（切片）
免疫荧光5标6色（切片）
免疫荧光6标7色（切片）
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文献和实验Annexin V凋亡流式双染与Tunel凋亡免疫组化案例介绍
的好处是可以在细胞凋亡发生的早期，即可侦测到DNA片段的产生，并且可以直接使用在组织切片上，观察细胞凋亡发生的位置。所以TUNEL目前为广泛接受与使用的一种细胞凋亡的分析方法。 实验服务注意事项 1. 实验委托者提供实验分组情况及实验背景资料，有具体要求请事先说明； 2. 实验委托者可提供组织块（以中性福尔马林或多聚甲醛固定，如组织块极小请事先说明）、蜡块或切片（使用免疫组化专用切片，以避免实验过程中掉片）； 3. TUNEL染色完毕后，照相1-2张/每切片，如需要图片分析请事先
作为肿瘤组织芯片，并使用多标记免疫荧光染色 OPAL 试剂盒，对 PD-L1 /CD8/FOXP3/DAPI 四通道同时进行多标及成像分析（如下图）。通过对肿瘤组织芯片多标数据的进一步分析发现，与周围正常组织相比，胃癌病人的肿瘤切片中， CD8/FOXP3 和 CD8/PD-L1 的比例有一定下降（下图 D/E），这也意味着在肿瘤微环境中，表达 PD-L1 的肿瘤细胞及其他肿瘤浸润免疫细胞，和 FOXP3 阳性调节性 T 细胞共同起着免疫抑制调控作用。文章中通过进一步临床数据分析发现，单独使用 CD
３０分钟。ＰＢＳ洗２次，蒸馏水洗１次。（４）甘油缓冲液封片。（５）对照染色，可作正常血清替代，灭活补体对照即经５６℃ ３０分钟灭活处理后，将灭活的补体与特异性抗体等量混合，进行染色，结果均应阴性。４．双重色疫荧光法在同一标本上有两种抗原需要直接显示时，可用不同的荧光素分别标记抗体进行染色。一步法双染色：先将两种标记抗体按适当比例混合，按直接法步骤进行。二步法双染色：先用一个标记抗体孵育，不必洗，再用另一个标记抗体孵育，按间接法步骤进行。５．注意事项（１）免疫荧光法最适宜进行冰冻切片的染色，因为此种
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