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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
180
- 英文名:
African Swine Fever virus CD2v deletion Detection Kit (Real-Time PCR Method)
- 保质期:
12个月
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
50T/盒
非洲猪瘟病毒 CD2v 基因缺失株(ASFV CD2v)核酸检测试剂盒(荧光 PCR 法)
基本信息
产品名称:非洲猪瘟病毒 CD2v 基因缺失株(ASFV CD2v)核酸检测试剂盒(荧光 PCR 法)
规格:25T / 盒、50T / 盒
适用仪器:ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
有效期:12 个月(-20℃避光保存,避免反复冻融)
预期用途
非洲猪瘟(英文名称:Infection with African swine fever virus,简称:ASF)是由非洲猪瘟病毒(英文名称: African Swine fever virus,简称:ASFV)感染家猪和各种野猪(如非洲野猪、欧洲野猪等)而引起的一种急性、出血性、烈性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病,该病也是我国重点防范的一类动物疫情。
本试剂盒适用于检测全血、血清、脾脏、淋巴结等样品中非洲猪瘟病毒 CD2v 基因缺失株核酸的检测,用于非洲猪瘟感染的辅助诊断。
检验原理
采用TaqMan 荧光探针法,针对 ASFV CD2v 基因缺失区域设计特异性引物 + FAM 标记探针。
一步法荧光 PCR 扩增,仅 CD2v 缺失株出现特异性扩增(FAM 通道阳性),野毒株无扩增。
内参对照(可选)监控提取与扩增抑制,避免假阴性。
试剂盒组分
组分 规格 备注
PCR 反应液(含引物 + 探针 + 酶) 1.2mL×1 管 棕色管,避光
阳性质控品(CD2v 缺失株质粒) 50μL×1 管 Ct≤32,S 型曲线
阴性质控品(无菌水) 50μL×1 管 无 Ct 或 Ct>38
说明书 1 份 含操作与判读标准
操作步骤(25μL 体系)
核酸提取:取样本(全血 / 组织 / 拭子),用病毒 DNA 提取试剂盒提取核酸,-20℃保存。
反应液配制:取 20μL PCR 反应液至 PCR 管,加入 5μL 模板(样本 / 阴控 / 阳控),总体系 25μL。
PCR 扩增程序:
预变性:95℃,2min(1 循环)
扩增(45 循环):95℃ 15sec→60℃ 30sec(60℃收集 FAM 荧光)
结果判读:
阳性:FAM 通道 Ct≤38,呈典型 S 型扩增曲线(CD2v 缺失株)
阴性:Ct>40 或无 Ct(野毒株或无 ASFV)
疑似:38
质控标准:
阳控:Ct≤32,S 型曲线
阴控:无 Ct 或 Ct>38
否则实验无效
性能指标
特异性:100%,不与猪瘟、伪狂犬、蓝耳、圆环等病毒交叉反应。
灵敏度:最低检测限16 拷贝 /μL。
重复性:批内 / 批间变异系数CV≤3%。
符合率:与 OIE 标准方法临床样本符合率 **≥98%**。
特点与优势
精准鉴别:直接区分 CD2v 缺失株与野毒株,适配疫苗免疫后监测。
快速高效:全程约1.5 小时,一步法操作,减少污染。
高敏特异:检测下限低,无交叉反应,结果可靠。
适用广:兼容多种样本类型,适配主流荧光 PCR 仪。
注意事项
严格分区(试剂准备 / 样本处理 / 扩增),防交叉污染。
试剂避光保存,避免反复冻融;阳控 / 阴控同步检测。
样本冷藏运输,-70℃长期保存,避免核酸降解。
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文献和实验非洲猪瘟病毒 CD2v 基因缺失株(ASFV CD2v)核酸检测试剂盒(荧光 PCR 法)
磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中(图3)。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素(FITC、PE)或biotin标记,以标记了的Annexin-V作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸
磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素(FITC、PE)或biotin标记,以标记了的Annexin-V作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶(propidine iodide
领域。例如,可以在PCR扩增中用同位素或荧光素等标记引物或核苷,也可以在电泳后用银染或溴化乙锭染色以显示结果。这里将重点介绍最常用的放射性同位素PCR-SSCP法。在进行PCR扩增特定靶基因序列时,利用γ-32P-ATP标记引物或直接在PCR反应体系中加入α-32P-dCTP进行PCR扩增,使扩增产物带有同位素标记物,然后将扩增产物变性为单链进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,放射自显影显示结果。利用引物标记或碱基掺入法使PCR扩增产物带有同位素标记物,均可使产物信号增强几个数量级。二者相比较,前者经济
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