人原代乳腺上皮细胞

人原代乳腺上皮细胞
乳腺位于皮下浅筋膜的浅层与深层之间。浅筋膜伸向乳腺组织内形成条索状的小叶间隔，一端连于胸肌筋膜，另一端连于皮肤，将乳腺腺体固定在胸部的皮下组织之中。乳房腺体由15-20个腺叶组成，每一腺叶分成若干个腺小叶，每一腺小叶又由10-100个腺泡组成，这些腺泡紧密地排列在小乳管周围，腺泡的开口与小乳管相连。
乳腺上皮细胞来源于乳腺小叶中。它们与腺体导管和脂肪组织一起在乳腺中形成复杂的网络结构。乳腺上皮细胞在人和动物体出生、发育和妊娠中均会受荷尔蒙调控而进行一系列的增长、迁移和分化。激素水平失调、细胞外基质的变化和其它的基因因素都会导致乳腺上皮细胞恶性增长，最终导致乳腺癌的发生。了解乳腺上皮细胞的特性可以帮助我们理解乳腺癌的病例机制以及为治疗确定新的靶点。

基本特性
组织来源：正常乳腺组织（多为乳腺手术标本，如乳腺缩小术、良性病变切除组织）。
细胞形态：贴壁生长，呈多角形 / 鹅卵石样，铺路石状排列；核大、胞质少，边界清晰。
主要亚型：
腔上皮细胞（Luminal）：乳腺导管内层，分泌功能，雌激素受体阳性。
肌上皮细胞（Myoepithelial）：基底层，收缩支持，表达 α-SMA、p63。
生长特点：有限传代（一般3–8 代），随后衰老；对培养基与生长因子依赖高。
标志物：阳性（CK8/18、CK19、E-cadherin）；阴性（CD31、CD45、vimentin，排除内皮、免疫、成纤维细胞）。

分离培养要点
1. 组织处理
取材后 24h 内处理，无菌 PBS（含双抗）清洗，去除脂肪与结缔组织。
剪碎至 1mm³，胶原酶 + 胰蛋白酶 / 分散酶 37℃消化 1–2h。
2. 细胞纯化
差速贴壁：成纤维细胞先贴壁，1–2h 后取未贴壁上皮细胞接种。
无血清培养基：角质细胞培养基（KGM）或专用乳腺上皮培养基，添加 EGF、胰岛素、氢化可的松、B27 等，抑制成纤维细胞并促进上皮生长。
3. 培养条件
环境：37℃、5% CO₂、饱和湿度。
传代：密度达 70–80% 时传代，胰酶消化，接种密度 5×10³–1×10⁴ cells/cm²。
冻存：90% 培养基 + 10% DMSO，程序降温后液氮保存。

主要应用
乳腺发育与泌乳研究：激素（雌、孕、催乳素）调控、乳腺干细胞分化、3D 类器官构建。
乳腺癌机制：癌基因 / 抑癌基因功能、肿瘤微环境、上皮 - 间质转化（EMT）、药物筛选与耐药机制。
毒理与环境：内分泌干扰物、致癌物筛选与风险评估。
疾病模型：乳腺炎、乳腺增生等病理机制研究。

与细胞系（如 MCF10A）区别
原代 HMEC：正常、有限传代、无致瘤性、最接近体内、批次差异大、培养难度高。
MCF10A：永生化正常乳腺上皮系、无限传代、基因型稳定、易培养、经长期培养后部分特性偏离原生状态。

常见问题与解决
成纤维细胞污染：差速贴壁 + 无血清培养基，必要时用 CD90 磁珠去除成纤维细胞。
细胞活力低、增殖慢：使用新鲜组织、优化消化时间、添加 ROCK 抑制剂（Y-27632）提高存活率。
过早衰老：降低传代密度、避免过度消化、使用低氧（5% O₂）培养环境。

产品与质控
质控标准：形态观察、标志物鉴定（免疫荧光 / 流式）、无菌检测、支原体阴性、活力≥90%。

产品使用
1)本产品仅能用于科研
2) 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
3)本产品未通过用于活体诊断的审核