全血/组织/细胞基因组DNA快速提取试剂盒

产品描述

本试剂盒采用了特殊的离心吸附柱和缓冲液体系，可以从全血/组织/细胞中快速提取基因组DNA。操作简单，使用方便。提取出的基因组DNA不含有蛋白和其他杂质，纯度极高。

本全血/组织/细胞DNA快速提取试剂盒通用型强，兼容性好，可广泛使用于各类全血/组织/细胞样本的提取。目前已验证可用于提取DNA的动物有人、大鼠、小鼠、兔、牛、马、猪、羊、狗、猫、鸡等的组织、细胞和全血。

产品组分

组分	存储	50T	100T	200T
蛋白酶K	4℃	1.25mL	2×1.25mL	4×1.25mL
Buffer ATL	室温	14mL	28mL	56mL
Buffer AL	室温	12mL	24mL	48mL
Buffer AW1	室温	20mL 第一次使用前请加入13mL无水乙醇	40mL 第一次使用前请加入26mL无水乙醇	80mL 第一次使用前请加入 52mL无水乙醇
Buffer AW2	室温	13mL 第一次使用前请加入30mL无水乙醇	26mL 第一次使用前请加入60mL无水乙醇	52mL 第一次使用前请加入120mL无水乙醇
Buffer AE	室温	10mL	20mL	100mL
离心柱和收集管	室温	50套	100套	200套

 

运输和保存方法

1）本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2）试剂盒储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3）避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品特点

1.不使用有毒的苯fen，氯仿等试剂。

2.简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3.适应性比较广泛，可以提取人、大鼠、小鼠、兔、牛、马、猪、羊、狗、猫、鸡等的组织、细胞和全血的基因组DNA。

4.多次柱漂洗确保高纯度，典型的产量200µl全血可提取出3-6µg，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达30 kb -50kb，可直接用于PCR、Southern-blot和各种酶切反应。

使用前必读

1、实验过程使用的离心机均可在室温进行（4℃也可以），转速可以达到12,000rpm的传统台式离心机。

2、需要自备乙醇、1×PBS、RNase A（100mg/mL）和溶菌酶（革兰氏阳性菌使用）等。

3、样品处理量不能超过离心柱的处理能力，否则容易导致DNA产量降低

4、ATL、AL和AW1中含有刺激性化合物，操作时务必戴手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5、不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大。

6、开始实验前将需要的水浴先预热到 56℃备用。

7、为了最佳效果，最好使用新鲜血液标本或者4℃存放少于 3 天的标本，不要使用反复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量。。

8、产品仅用于科研等非医疗用途

使用方法

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer AW1，Buffer AW2中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

一、全血

 

1、取200μL新鲜、冷冻或加入抗凝剂的血液，放入1.5mL离心管。

   注：若全血起始量小余200μL，则需用PBS补足到200μL。若起始量超过300μL，则需要先进行红细胞裂解操作（见本说明书后附录）

   若处理血液样本为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核

细胞，因此处理量仅用5-20μL，可加1×PBS补足到200μL后进行后续步骤。

2、加入20μL的Proteinase K到上述离心管中，充分混匀，再加入200μL 的Buffer AL，立刻涡旋振荡充分混匀，在56℃孵育10min。如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在加入Buffer AL之前加5μL RNase A（100mg/mL）溶液，振荡混匀，室温放置5-10 min。

3、加入200μL无水乙醇到样品中，涡旋振荡充分混匀。

4、将上述混合液加入到组装好的（离心柱放入收集管中）离心柱中，12,000rpm离心1min，弃废液。

5、加入500μL的Buffer AW1，12,000rpm离心30s，弃废液。

6、加入500μL的Buffer AW2，12,000rpm离心30s，弃废液。

7、重复一遍步骤6.

8、将离心柱放回空的收集管中，12,000rpm离心2min，尽量去除残留液体，以免影响下游反应。

9、将离心柱放入一个新的1.5mL离心管中，向离心柱膜的中央加入100-200μL Buffer AE（Buffer AE可事先在80℃下预热，以提高DNA产量），室温放置3min，12,000rpm离心1min。洗脱体积越大、洗脱效率越高，本试剂盒最小洗脱体积不应该低于50μL。

10、可将步骤9中洗脱所得的溶液重新加入离心柱中，室温放置2min，12,000rpm离心1min，可以提高DNA的浓度。（该步骤为可选步骤）

 

二、培养细胞

 

1、收集约105-106悬浮细胞到1.5 m离心管；对于贴壁细胞，应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。

2、12, 000 rpm 离心 10 sec，使细胞沉淀下来。吸弃上清，留下细胞团。

3、加入200μL PBS重悬洗涤细胞，12, 000 rpm 离心 10 sec，使细胞沉淀下来。完全吸弃上清，将细胞沉淀重悬于180μL的PBS中。

4、加入20μL的Proteinase K到上述离心管中，充分混匀，再加入200μL 的Buffer AL，立刻涡旋振荡充分混匀，在56℃孵育10min。如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在加入Buffer AL之前加5μL RNase A（100mg/mL）溶液，振荡混匀，室温放置5-10 min。

5、加入200μL无水乙醇到样品中，涡旋振荡充分混匀。

6、将上述混合液加入到组装好的（离心柱放入收集管中）离心柱中，12,000rpm离心1min，弃废液。

7、加入500μL的Buffer AW1，12,000rpm离心30s，弃废液。

8、加入500μL的Buffer AW2，12,000rpm离心30s，弃废液。

9、重复一遍步骤8.

10、将离心柱放回空的收集管中，12,000rpm离心2min，尽量去除残留液体，以免影响下游反应。

11、将离心柱放入一个新的1.5mL离心管中，向离心柱膜的中央加入100-200μL Buffer AE（Buffer AE可事先在80℃下预热，以提高DNA产量），室温放置3min，12,000rpm离心1min。洗脱体积越大、洗脱效率越高，本试剂盒最小洗脱体积不应该低于50μL。

12、可将步骤9中洗脱所得的溶液重新加入离心柱中，室温放置2min，12,000rpm离心1min，可以提高DNA的浓度。（该步骤为可选步骤）

 

三、动物组织

 

1、将20-50mg组织用解刨到切成小碎块或在液氮中研磨成细粉，转入到装有180μL Buffer ATL的1.5mL离心管中。

2、加入20μL的Proteinase K到上述离心管中，立刻涡旋振荡充分混匀，在56℃孵育水浴1-3小时或者直到组织消化完全为止，期间轻柔的振荡几次，帮助裂解。如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在组织裂解完成后加5μL RNase A（100mg/mL）溶液，振荡混匀，室温放置5-10 min。

3、涡旋15s后，加入200μL的Buffer AL到样品中，立刻涡旋振荡充分混匀。

4、加入200μL无水乙醇到样品中，涡旋振荡充分混匀。

5、将上述混合液加入到组装好的（离心柱放入收集管中）离心柱中，12,000rpm离心1min，弃废液。

6、加入500μL的Buffer AW1，12,000rpm离心30s，弃废液。

7、加入500μL的Buffer AW2，12,000rpm离心30s，弃废液。

8、重复一遍步骤7.

9、将离心柱放回空的收集管中，12,000rpm离心2min，尽量去除残留液体，以免影响下游反应。

10、将离心柱放入一个新的1.5mL离心管中，向离心柱膜的中央加入100-200μL Buffer AE（Buffer AE可事先在80℃下预热，以提高DNA产量），室温放置3min，12,000rpm离心1min。洗脱体积越大、洗脱效率越高，本试剂盒最小洗脱体积不应该低于50μL。

11、可将步骤9中洗脱所得的溶液重新加入离心柱中，室温放置2min，12,000rpm离心1min，可以提高DNA的浓度。（该步骤为可选步骤）

 

红细胞裂解操作

附录（以500μL为例）

1、向1.5mL无菌的离心管中加入 1mL RBC 溶液（RBC可向本公司购买，货号：HRA2081）。

2、加入500μL全血，上下颠倒混匀（请勿使用涡旋仪）

3、在水平摇床或者旋转摇床上摇动 10min（环境温度尽量控制在 15℃-25℃之间）；或者手动上下翻转离心管 10min。

4、将离心管放置离心机中，以 2500rpm （500×g）转速离心 5min。

5、用移液器小心吸取上清液并丢弃。

6、加入 1mL RBC 溶液到离心管的白色颗粒中，通过“弹管”混匀，直到颗粒被重悬（不要使用涡旋仪）。

7、将离心管放置离心机中，以 2500rpm（500×g）转速离心 3min。

8、小心吸取并丢弃上清液，特别是在白色颗粒外表面形成的红色血细胞碎片环。

9、用 200μL PBS 重悬白色颗粒，充分分散白细胞团。

10、现在可以按照说明书提取全血基因组DNA了。