土壤基因组DNA快速提取试剂盒
中文名:土壤基因组DNA快速提取试剂盒
英文名:Soil gDNA Extract Kit
CAS:N/A
级别:N/A
分子量:N/A
分子式:N/A
纯度:N/A
储存条件:RT
产品简介
(一)土壤样品处理:
1. 65℃预热裂解液I,待其沉淀溶化后充分混匀,取 0.5 mL 加入到 1.5 mL 离心管中并置于 65℃。
2. 称取 0.1-0.3 g 的土壤,加入到装有预热的裂解液I的离心管中,震荡器上剧烈震荡 5-10 min 。
注意:如样品处理量较大,可按比例增大样品处理体积,但需保证震荡充分。
3. 将离心管置于 65℃水浴中保温10 min。
(二)土壤DNA纯化:
1. 12,000 rpm 室温离心 3 min,将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色,实际颜色取决于腐殖酸的含量,上清液的体积一般为300-400 µL)。
2. 在上清液中加入等体积的裂解液II,上下颠倒 30 秒充分混匀,溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
3. 将离心管冰浴至少 5 min。
4. 12,000 rpm 室温离心 3 min,转移上清到新的 1.5 mL 离心管中,上清液颜色将比上步得到的上清的颜色稍淡,体积在 0.7 mL 左右。
5. 加入 0.2 mL 的氯仿(自备),震荡器上充分振荡 30 s混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
6. 12,000 rpm 室温离心 3 min,小心转移0.6 mL上清到新离心管中。
(三)基因组DNA收集:
1. 在步骤(二)所得的上清中加入1.5倍体积的结合液III(0.9 mL),颠倒数次混匀后,分两次上DNA吸附柱,每次上柱后均先室温放置 2 min,然后 12,000 rpm 离心 1 min,倒掉穿透液。
2. 在吸附柱中加入500 μL洗涤液,12,000 rpm离心1 min,弃穿透液。重复洗涤一次。
3. 再将吸附柱12,000 rpm离心30 s以甩干乙醇。
4. 将吸附柱放入一个干净的1.5 mL离心管中。在吸附柱中央加入50 μL洗脱液(65-70℃预热),室温静置2 min。12,000 rpm离心2 min。将穿透液重新加入吸附柱中央,12,000 rpm离心1 min以洗脱更多基因组DNA。
5. 检测DNA质量。将所得的基因组DNA保存于-20ºC冰箱。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!