人外周血中性粒细胞

人外周血PBMC的制备及注意事项

人外周血PBMC的制备流程 收集抗凝人外周血，用 1640 无血清培养基或 PBS 按照 1:1 的比例稀释，上下颠倒混匀或者用移液枪吹打混匀。 在 15 mL 离心管中，先加入 3 mL 充分混匀的 Ficoll 液（1.077 g/mL），再沿着管壁缓慢加入2 mL稀释后的血液，血液和 Ficoll 液分层明显为成功。 注：Ficoll 提前半小时从 4℃ 冰箱取出恢复到室温，温度过高会导致分离不明显，温度过低会导致密度过大，同样分离效果不好， 20~25℃ 最佳。。 将样本小心转移

人外周血中性粒细胞制备

抗凝血，加1/4体积的6%右旋糖酐生理盐水，混匀后在室温静置30～45min，使红细胞下沉； (2)取上层细胞按1：1比例叠加到聚蔗糖-泛影葡胺分层液面上，500r/min离心30min； (3)将沉淀细胞用0.83% NH4 Cl溶液破坏红细胞，离心洗涤后，悬于2～3ml 0.1%白明胶Hank’s液中，计数并调整细胞浓度； (4)取细胞液涂片，分别作台盼蓝拒染试验和Giemsa染色，鉴定其存活率与纯度。 (二)大量中性粒细胞的分离方法 [试剂及配制]

人外周血单细胞悬液制备流程及注意事项

人外周血单细胞悬液制备流程 1.采集人外周血样本于抗凝管中。 离心管内加入100 μL新鲜血和2 mL 1×红细胞裂解液，混匀，4℃裂解10 min。 300 g离心5 min（裂解完立即离心，防止时间过长损伤细胞），弃上清，得到白色细胞沉淀。 PBS洗涤一次。 加入100 μL细胞染色缓冲液重悬细胞，不用计数，即可进行后续流式抗体染色实验。按照100 μL新鲜血样本制备的单细胞悬液，加入1 Test对应的流式抗体混匀进行后续实验。 注意事项： 1. 采血用抗凝管，有肝素和EDTA两种