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CCK8/细胞增殖检测

CCK8/细胞增殖检测
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和元生物技术(上海)股份有限公司
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产品详情

简介: 细胞增殖与活性检测试剂盒(OBiO Cell Counting Kit)提供了一种灵敏度高、操作简便、使用安全的细胞增殖与活性检测方法,与传统的MTT实验相比具有明显的优势。
提供商: 和元上海
服务名称: CCK-8/CCK8/细胞增殖/细胞增殖检测/细胞功能检测/细胞实验
地区: 上海
规格: 2500元起

CCK8/细胞增殖检测

 

摘要:

在293T细胞中过表达human Oct-4基因,通过CCK-8方法对Oct-4过表达细胞组、空细胞组与阴性对照组的细胞增殖进行定量,研究Oct-4基因对293T细胞增殖能力的影响。实验结果显示Oct-4基因的表达促进293T细胞的增殖能力。为进一步深入研究Oct-4基因的功能提供实验数据。

关键词:Oct-4,CCK-8,细胞增殖 293T

 

一、实验原理

细胞增殖是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的细胞,用来补充体内衰老和死亡的细胞;同时,多细胞生物可以由一个受精卵,经过细胞的分裂和分化,最终发育成一个新的多细胞个体。通过细胞分裂,可以将复制的遗传物质,平均地分配到两个子细胞中去。细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。细胞增殖的研究方法有很多,主要包括:BrdU,EdU,CCK-8等方法。和元上海采用CCK-8检测细胞增殖。

 

二、实验目的

用质粒Oct-4-EGFP转染后的细胞与正常细胞组、阴性对照组进行比较分析,考察Oct-4基因对细胞的增殖能力产生的影响。采用CCK-8法对3组细胞进行比较分析。

 

三、实验步骤

实验共分以下5个主要步骤:

1. 收集细胞:
收集细胞:将293T细胞消化后制成单细胞悬液,计数后,每组细胞配成一定浓度的单细胞悬液。
2. 细胞铺板;
细胞配成2×104cell/mL后,每孔铺100μL细胞,即2000cell/well。一般每个样品设5~6个复孔,边缘孔加100μL无菌水或者PBS。37度,5%CO2培养箱中培养。
3. 质粒转染;
16h后,按照转染试剂说明书转染细胞(0.2μg质粒,0.5μL转染试剂lipofectamine 2000)
4. 细胞培养6、24、48、72h CCK-8处理,酶标仪检测;
转染后, 在每个检测时间点加入10μL的CCK-8于孔中,无需换液。3h后,酶标仪450nm检测OD值。
5. 统计分析。
GraphPad Prism(Ver5,GraphPad Software)作图,并进行双侧t检验。

 

四、实验结果

图1. 过表达Oct-4对293T细胞增殖能力的影响

结论:从实验结果以及克隆数的统计分析可以发现,293T细胞在过表达Oct-4-GFP后,72h的增殖能力均高于空细胞组以及对照组(p<0.001)。

 

五、参考文献
1. Ishiyama M, Tominaga H, Shiga M, Sasamoto K, Ohkura Y, Ueno K. A combined assay of cell viability and in vitro cytotoxicity with a highly water-soluble tetrazolium salt, neutral red and crystal violet. Biol Pharm Bull. 1996 Nov;19(11):1518-20.
2. Ishiyama M, Miyazono Y, Sasamoto K, Ohkura Y, Ueno K. A highly water-soluble disulfonated tetrazolium salt as a chromogenic indicator for NADH as well as cell viability. Talanta. 1997 Jul;44(7):1299-305.
3. Isobe I, Michikawa M, Yanagisawa K. Enhancement of MTT, a tetrazolium salt, exocytosis by amyloid beta-protein and chloroquine in cultured rat astrocytes. Neurosci Lett. 1999 May 7;266(2):129-32.
4. Matsuoka M, Wispriyono B, Igisu H. Increased cytotoxicity of cadmium in fibroblasts lacking c-fos. Biochem Pharmacol. 2000 Jun 15;59(12):1573-6.
5. Bai Y, Suzuki AK, Sagai M. The cytotoxic effects of diesel exhaust particles on human pulmonary artery endothelial cells in vitro: role of active oxygen species. Free Radic Biol Med. 2001 Mar 1;30(5):555-62.
6. Mousses S, Wagner U, Chen Y, Kim JW, Bubendorf L, Bittner M, Pretlow T, Elkahloun AG, Trepel JB, Kallioniemi OP. Failure of hormone therapy in prostate cancer involves systematic restoration of androgen responsive genes and activation of rapamycin sensitive signaling. Oncogene. 2001 Oct 11;20(46):6718-23.
7. Kanemura Y, Mori H, Kobayashi S, Islam O, Kodama E, Yamamoto A, Nakanishi Y, Arita N, Yamasaki M, Okano H, Hara M, Miyake J. Evaluation of in vitro proliferative activity of human fetal neural stem/progenitor cells using indirect measurements of viable cells based on cellular metabolic activity. J Neurosci Res. 2002 Sep 15;69(6):869-79.
8. Uchida E, Mizuguchi H, Ishii-Watabe A, Hayakawa T. Comparison of the efficiency and safety of non-viral vector-mediated gene transfer into a wide range of human cells. Biol Pharm Bull. 2002 Jul;25(7):891-7.
9. Yoshimura K, Tanimoto A, Abe T, Ogawa M, Yutsudo T, Kashimura M, Yoshida S. Shiga toxin 1 and 2 induce apoptosis in the amniotic cell line WISH. J Soc Gynecol Investig. 2002 Jan-Feb;9(1):22-6.

 

细胞功能相关技术服务:
      细胞功能实验
      稳转细胞株筛选
      细胞凋亡检测
      细胞增殖检测
      细胞周期检测
      细胞迁移/细胞侵袭实验
      克隆形成实验
      细胞划痕实验
      有效靶点筛选

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CCK8/细胞增殖检测 摘要:在293T细胞中过表达human Oct-4基因,通过CCK-8方法对Oct-4过表达细胞组、空细胞组与阴性对照组的细胞增殖进行定量,研究Oct-4基因对293T细胞增殖能力的影响。实验结果显示Oct-4基因的表达促进293T细胞的增殖能力。为进一步深入研究Oct-4基因的功能提供实验数据。关键词:Oct-4,CCK-8,细胞增殖 293T 一、实验原理细胞增殖是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的细胞,用来补充体内衰老和死亡的细胞;同时,多细胞生物可以由一个受精卵,经过细胞的分裂和分化,最终发育成一个新的多细胞个体。通过细胞分裂,可以将复制的遗传物质,平均地分配到两个子细胞中去。细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。细胞增殖的研究方法有很多,主要包括:BrdU,EdU,CCK-8等方法。和元上海采用CCK-8检测细胞增殖。 二、实验目的用质粒Oct-4-EGFP转染后的细胞与正常细胞组、阴性对照组进行比较分析,考察Oct-4基因对细胞的增殖能力产生的影响。采用CCK-8法对3组细胞进行比较分析。 三、实验步骤实验共分以下5个主要步骤:1. 收集细胞:收集细胞:将293T细胞消化后制成单细胞悬液,计数后,每组细胞配成一定浓度的单细胞悬液。2. 细胞铺板;细胞配成2×104cell/mL后,每孔铺100μL细胞,即2000cell/well。一般每个样品设5~6个复孔,边缘孔加100μL无菌水或者PBS。37度,5%CO2培养箱中培养。3. 质粒转染;16h后,按照转染试剂说明书转染细胞(0.2μg质粒,0.5μL转染试剂lipofectamine 2000)4. 细胞培养6、24、48、72h CCK-8处理,酶标仪检测;转染后, 在每个检测时间点加入10μL的CCK-8于孔中,无需换液。3h后,酶标仪450nm检测OD值。5. 统计分析。GraphPad Prism(Ver5,GraphPad Software)作图,并进行双侧t检验。 四、实验结果图1. 过表达Oct-4对293T细胞增殖能力的影响结论:从实验结果以及克隆数的统计分析可以发现,293T细
★ 服务描述         细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。细胞增殖的研究方法有很多,其中测定细胞生长曲线是检测细胞绝对生长数的常用方法,也是判定细胞活力的重要指标。我公司通过CCK-8和克隆形成实验来测定细胞的生长和增殖能力。★ 服务内容    1:CCK-8检测细胞毒性实验;              CCK-8检测细胞毒性的原理是:CCK8在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。细胞毒性越小,则颜色越深;因此,对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。    2:克隆形成实验;              克隆形成实验是测定细胞增殖能力的有效方法之一。其原理是:单个细胞在体外增殖6代以上,其后代所形成的细胞群体称为克隆。每个克隆约含有50个以上的细胞。通过计数克隆形成率,可以反映细胞的增殖能力和独立生存能力。常用的方法有:平板克隆形成实验和软琼脂培养克隆形成实验。           ①:平板克隆形成实验                           该方法操作简单,适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。实验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。 细胞一定要分散成单个细胞,不能有细胞团。同时,接种密度不能过大。           ②:软琼脂培养克隆形成实验                           软琼脂培养法常用于检测肿瘤细胞和转化细胞系。实验中琼脂与细胞相混时,要注意控制琼脂的温度不宜超过40℃。细胞的密度每平方厘米不超过35个,一般6cm的平皿接种1000个细胞。正常细胞在悬浮状态下不能增殖,不适用于软琼脂克隆形成试验。★ 客户所得    1:克隆形成实验的原始图片及分析结果;    2:完整的实验报告(包括实验材料,实验步骤,实验结果等);公司邮箱:service@hanyinbt.com  (客户服务)   tech@hanyinbt.com (技术支持) 公司电话:021-64825535             联系手机:15026752494(赵先生)       15800793600(高先生)公司传真:021-64825535             QQ:283
  细胞增殖及相关服务     服务流程   服务说明   细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖、遗传的基础,是细胞最基本的生理活动。生长因子、激素及癌基因产物等均可诱导细胞的增殖或抑制细胞的增殖,通过影响细胞周期的运行、细胞凋亡的改变而实现。   MTT检测细胞增殖 MTT为一种化合物,全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide。MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法,其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在 490nm波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比,因此MTT的吸光值可间接反映活细胞数量。该方法已广泛用于抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。 吉凯实验实例: 不同基因的过表达慢病毒感染细胞,继续培养三天后,收集对数期细胞,向96孔板每孔加入2000个细胞,细胞培养箱孵育至细胞贴壁,向孔板中加入MTT溶液,并继续培养4h。最后去除MTT,加入二甲基亚砜溶解MTT,酶标仪读取OD490时的吸光值。   CON:未处理细胞实验组; NC:对照慢病毒感染实验组; OE:目的基因过表达慢病毒感染实验组。 结论:目的基因过表达后,细胞生长受到抑制。 收费标准:2250元/组,MTT检测在96孔板中进行,60孔为一组实验。   克隆形成实验 是测定细胞的增殖能力的有效方法之一。单个细胞在体外持续6代以上,其后代所组成的细胞群称为克隆。这时每个克隆含有50个以上的细胞,大小在0.3~1.0mm之间,通过计数克隆形成率,可对单个细胞的增殖潜力做定量分析,了解细胞的增殖能力和独立生存能力。常用的方法有:平板克隆形成实验和软琼脂形成实验。 吉凯基因实验实例:  1、平板克隆形成:分别将阴性对照靶点和目的基因有效靶点慢病毒感染细胞,四天后,将处于对数生长期的细胞消化,计数后在6孔板培养板
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