CCK8/细胞增殖检测

CCK8/细胞增殖检测

摘要：

在293T细胞中过表达human Oct-4基因，通过CCK-8方法对Oct-4过表达细胞组、空细胞组与阴性对照组的细胞增殖进行定量，研究Oct-4基因对293T细胞增殖能力的影响。实验结果显示Oct-4基因的表达促进293T细胞的增殖能力。为进一步深入研究Oct-4基因的功能提供实验数据。

关键词：Oct-4，CCK-8，细胞增殖 293T

一、实验原理

细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老和死亡的细胞；同时，多细胞生物可以由一个受精卵，经过细胞的分裂和分化，最终发育成一个新的多细胞个体。通过细胞分裂，可以将复制的遗传物质，平均地分配到两个子细胞中去。细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。细胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK-8等方法。和元上海采用CCK-8检测细胞增殖。

二、实验目的

用质粒Oct-4-EGFP转染后的细胞与正常细胞组、阴性对照组进行比较分析，考察Oct-4基因对细胞的增殖能力产生的影响。采用CCK-8法对3组细胞进行比较分析。

三、实验步骤

实验共分以下5个主要步骤：

1. 收集细胞：
收集细胞：将293T细胞消化后制成单细胞悬液，计数后，每组细胞配成一定浓度的单细胞悬液。
2. 细胞铺板；
细胞配成2×10⁴cell/mL后，每孔铺100μL细胞，即2000cell/well。一般每个样品设5~6个复孔，边缘孔加100μL无菌水或者PBS。37度，5%CO₂培养箱中培养。
3. 质粒转染；
16h后，按照转染试剂说明书转染细胞（0.2μg质粒，0.5μL转染试剂lipofectamine 2000）
4. 细胞培养6、24、48、72h CCK-8处理，酶标仪检测；
转染后， 在每个检测时间点加入10μL的CCK-8于孔中，无需换液。3h后，酶标仪450nm检测OD值。
5. 统计分析。
GraphPad Prism（Ver5，GraphPad Software）作图，并进行双侧t检验。

四、实验结果

图1. 过表达Oct-4对293T细胞增殖能力的影响

结论：从实验结果以及克隆数的统计分析可以发现，293T细胞在过表达Oct-4-GFP后，72h的增殖能力均高于空细胞组以及对照组（p<0.001）。

五、参考文献
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