Aminophenyl fluorescein (APF)

产品描述

氨基本基荧光素（APF）和羟苯基荧光素（HPF）是由T. Nagano开发的两种活性氧（Reactive oxygen species, ROS）指示剂，比H2DCFDA（DCFH-DA, DCFH）具更优秀的特异性和稳定性。APF和HPF显示有限的非选择性反应，和相对较高的光诱导氧化抗性。APF和HPF具细胞膜渗透性，本身无荧光，直到与羟基自由基或过氧亚硝基阴离子反应，还能与次氯酸阴离子反应，产生强绿色荧光（Ex/Em：~490/515nm），可用荧光显微镜、高通量成像仪、荧光酶标板或流式细胞仪检测。

本品以粉末形式提供，可直接溶于DMF配制成5mM储存液，常用工作浓度范围1-10μM，需根据自身的实验体系或参考文献进行优化。

产品特性

1）同义名：3′-(p-aminophenyl) fluorescein氨基本基荧光素

2）分子式：C26H17NO5

3）分子量：423.42

4）纯度：≥95%

5）Ex/Em：490/515nm

6）溶解性：溶于DMSO（10mM）、DMF（5mM）

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法

一、储存液制备

将低温保存的1mg粉末置于室温回温至少20min，之后加入472μl 无水DMF配置成5mM储存液。充分溶解和混匀后，按照单次用量分装，-20ºC避光干燥保存，避免反复冻融。

【注】：APF能溶于DMSO（10mM），但有数据显示DMSO是羟基自由基的淬灭剂，会干扰检测和降低灵敏性。因此，建议用DMF作为溶剂。

二、溶液体系检测

正式实验前，取一管HPF储存液置于室温回温，使其充分融解。之后用合适的缓冲液（比如HHBS缓冲液，PBS缓冲液）稀释到所需的工作浓度。建议起始浓度为1-10μM，需根据自身的实验体系或参考文献进行优化。

三、细胞体系检测

以下实验步骤仅做参考，最佳的工作浓度、孵育时间和温度需根据实际情况进行调整。在加入APF工作液之前按需处理细胞。

1）   根据具体用量，将DMF储存液用HHBS缓冲液或其他生理缓冲液稀释成1-10μM工作液。

2）   根据实验设计处理细胞（比如，RASM细胞用50-100nM 血管紧张素II处理3-5h）。

3）   取步骤1）准备的1-10μM工作液加入细胞，37ºC孵育20-60min。

4）   吸掉染色工作液，用HHBS或其他生理缓冲液替换。

5）   用合适的荧光仪器（Ex/Em=492/515nm）来检测。

【注1】：BSA和酚红会影响荧光，需谨慎使用。

【注2】：HPF和APF能用于溶液体系或胞内ROS检测。

注意事项

1）APF和HPF仅用于科研研究，不可用于体外诊断研究。

2）APF和HPF产生的荧光相对于其他活性氧探针比如DCFH弱很多，这是探针本身的特性决定的（见附表1 活性氧探针（HPF, APF, DCFH）对各种活性氧物质的反应特异性）。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。