相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
现货
- 英文名:
Fast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (for PCR/qPCR)
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
10T/100T
| 规格: | 10T | 产品价格: | ¥200.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100T | 产品价格: | ¥1200.0 |
产品简介
本产品在经典的反转录试剂基础上,优化了反应时间,总反应时长最快可低于6分钟,且具有稳定的检出率、特异性、产量保证,适合具有复杂的RNA模板、少量模板以及低拷贝基因的反转录。
本产品反转录产物,可用于下游PCR或qPCR应用。试剂盒提供两种cDNA合成引物:Random Primers N6和Oligo (dT)18,用户可根据需要选择使用。
产品储存
-25℃~ -15℃保存,有效期1年。
操作注意
1. 所有操作均应在冰上进行,且操作过程应避免 RNase 污染。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途!
操作说明
一、含gDNA去除反转录步骤
1. gDNA消化
在RNase-free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
|
组分 |
使用量 |
|
5×gDNA Digester Mix |
2 μL |
|
Total RNA or mRNA |
Total RNA:10 pg-5 μg mRNA:10 pg-500 ng |
|
RNase-free H2O |
Up to 10 μL |
【注】:建议Total RNA的投入量不超过2 μg。如果目的基因表达丰度低,可增加投入量至最多5 μg。
2. 反转录体系配置
|
组分 |
使用量 |
|
上一步反应液 |
10 μL |
|
4×Fast cDNA Synthesis Mix (No Dye) |
5 μL |
|
Oligo d(T)18 Primers(50 μM) or Random Primers(50 μM) |
2 μL |
|
RNase-free H2O |
Up to 20 μL |
【注】:1)引物投入量可根据模板投入量调整,若下游实验为qPCR,可在体系中按推荐量添加 Random Primers;2)建议先加入4×Fast cDNA Synthesis Mix (No Dye)混匀后再加入反转录引物,以保证引物不受gDNA Digester影响;3)体系配制完成后,请用移液器轻轻吹打混匀。
3. 反转录程序设置
|
温度 |
时间 |
|
55℃ |
5 min |
|
85℃ |
5 sec |
二、不含gDNA去除反转录步骤
1. 反转录体系配置
|
组分 |
使用量 |
|
4×Fast cDNA Synthesis Mix (No Dye) |
5 μL |
|
Oligo d(T)18 Primers(50 μM) or Random Primers(50 μM) |
2 μL |
|
Total RNA or mRNA |
Total RNA:10 pg-5 μg mRNA:10 pg-500 ng |
|
RNase-free H2O |
Up to 20 μL |
2. 反转录程序设置
|
温度 |
时间 |
|
55℃ |
5 min |
|
85℃ |
5 sec |
【注】:
1)建议Total RNA的投入量不超过2 μg。如果目的基因的表达丰度低,可增加投入量至最多5 μg。
2)引物投入量可根据模板投入量调整,若下游实验为qPCR,可在体系中按推荐量添加Random Primers;
3)对于高GC含量模板或者复杂模板,可将反转录温度提高到60℃。
4)本产品可合成14 kb以下的cDNA序列,如需得到更长的cDNA产物,可适当延长反转录时间。
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验本产品在经典的反转录试剂基础上,优化了反应时间,总反应时长最快可低于6分钟,且具有稳定的检出率、特异性、产量保证,适合具有复杂的RNA模板、少量模板以及低拷贝基因的反转录。
methylation analysis, PCR, and multiplex PCR. The purified total RNA is ready to use in any application, such as RT-PCR, real-time RT-PCR, differential display, cDNA synthesis, Northern, dot, and slot blot analyses, and microarray analysis. The kits form
性,因而即使是最具挑战性的模板也可以进行有效的RT-PCR.。 通过SuperMix形式快速合成cDNA SuperScript™ III First—Strand Synthesis SuperMix将所有进行强大的、灵敏的第一链cDNA合成所必须的组分组合成快速、易于使用的 SuperMix形式。SuperMix形式包含 2x RT缓冲反应混合物、dNTPs、MgCl2、 以及由SuperScript™ III RT和RNaseOUT™.组成的酶混合物。也提供优化的退火缓冲
一. Superscipt II―RT 合成第一链 : 1. 在一RNase-free的0.2ml PCR管中,加入 xul mRNA(大约500ng) 1ul Xho I Primer(1.4ug/ul) (5’ GAGAGAGAGAGAGAGAGAGAACTAGTCTCGAG TTTTTTTTTTTTTTTTTT…3’) 11-x ul RNase-free water (大于
技术资料








