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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
现货
- 英文名:
2×PCR Master Mix (No Dye)
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
1mL/5×1mL/50×1mL/100×1mL
| 规格: | 1mL | 产品价格: | ¥40.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 5×1mL | 产品价格: | ¥150.0 |
| 规格: | 50×1mL | 产品价格: | ¥1200.0 |
| 规格: | 100×1mL | 产品价格: | ¥2000.0 |
产品简介
本品是即用型的常规PCR预混合溶液,含有Taq DNA Polymerase、dNTP混合物、MgCl2以及优化的缓冲体系。反应时只需加入引物和模板即可进行扩增,大大简化实验的操作步骤。产品中含有溴酚蓝染料,PCR产物可以直接进行电泳。本产品中含有优良的稳定剂,在4℃条件下可以放置3个月。PCR产物具有3’-dA突出端,可轻松克隆至T载体。
产品储存
-25~-15℃储存,有效期2年。干冰运输。
操作注意
1.本产品PCR产物不适用于聚丙希酰胺凝胶电泳。
2.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3.本产品仅作科研用途!
操作说明
1.PCR反应体系和程序
|
组分 |
体积 (μL) |
|
循环步骤 |
温度 (°C) |
时间 |
循环数 |
|
模板DNA |
适量 |
|
预变性 |
94 |
5 min |
1 |
|
Primer 1 (10 μM) |
2 |
|
变性 |
94 |
30 sec |
35 |
|
|
2 |
|
退火 |
50-60 |
30 sec |
|
|
|
25 |
|
延伸 |
72 |
30-60 sec/kb |
|
|
|
to 50 |
|
终延伸 |
72 |
10 min |
1 |
|
表1 扩增体系(50 μL) |
|
表2 扩增条件 |
||||
【注】:使用前请务必将其彻底混匀。
1)模板使用量:基因组DNA:50-200 ng;质粒DNA:0.1-10 ng。
2)Mg2+浓度:本产品中含有3 mM的MgCl2,适合大部分PCR反应。
3)退火温度:请参考引物的理论Tm值,退火温度可设置低于引物理论值2-5℃。
4)延伸时间:分子鉴定建议30 sec/kb。基因克隆建议60 sec/kb,以保证产物量达到最高。
应用实例

图1:2×PCR Master Mix 扩增1.2 kb片段。产品分别在-20℃放置1年,4°C放置3个月,25℃放置1个月后均可有效扩增目的片段。
模板:拟南芥基因组;退火温度:60℃;延伸时间:40 sec。
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文献和实验本产品中含有优良的稳定剂,在4℃条件下可以放置3个月。PCR产物具有3’-dA突出端,可轻松克隆至T载体。
成功做完了逆转录,这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多,即使使用了 qPCR 预混液,也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列(Q411 /Q421 /Q431 /Q441)提供不同颜色的试剂,利用移液过程中的变色效应,追踪移液过程,可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时,引物设计需遵循以下原则:引物长度 18~25bp,产物长度 80~300bp,GC 含量 40~60
-crack to help liberate the DNA. Check that the solution actually freezes. Overlay with a drop of mineral oil and incubate at 60°C for 60 minutes, followed by 95°C for 15 minutes. Cool to 4°C. Pipette 22.5 l of PCR master mix
聚合酶。这种酶适用于常规扩增,但是使用其他热稳定聚合酶会改善结果。扩增反应还包括缓冲液,三磷酸脱氧核苷及镁离子。镁离子浓度影响酶的活性、引物退火、模板和PCR产物的熔点(Tm),忠实性以及引物二聚体的形成等。在随后的章节中将讨论这些成分、循环参数以及其他参与作用的因子相互间各种作用对于成功PCR的影响。 表1. 反应成分 Component Final Concentration Template 10^4-10^6 copies of DNA template Primer
技术资料








