SureLight™ PerCP Cyanine 5.5

Cyanine Dye Purification Protocol

nm and, if necessary, dilute the sample down to a concentration that will not exceed the capacity of the column (Dionex NucleoPac™ 9 ´ 250 PA-100; P/N 43011 (anion exchange) column listed bel ow). Typically a 1 ml injection loop is used to inject a 10

流式课堂 | 流式实验对照设置之 FMO

大部分老师做流式实验时，会用到空白对照、单阳对照、同型对照、生物学对照等，用到 FMO 对照的比较少。尽管如此，FMO 对照在设置圈门时仍具有重要的参考价值。 一方面，FMO 对照有助于精确地设置阴阳性群体界限。我们在做多色实验时，可能会出现某些通道信号难以区分的情况，主要是因为其他某个荧光对该通道的干扰很大。FMO 对照（Fluorescence Minus One，荧光扣除一）减少了其中一个通道的荧光抗体，能够帮助衡量其它通道的荧光漏溢情况。 如下图所示，PerCP/Cyanine

优化流式配色的小技巧

光猝灭），而受体发射的荧光却大大增强（敏化荧光）。 激发和发射波长之间的差异称为「斯托克斯频移」，而在选择用于流式细胞实验的荧光素时，我们希望具有尽可能大的斯托克斯频移，以将发射光与激发光源可靠地区分开。因此，串联染料在这个意义上比单分子染料更有优势。 但是有些串联荧光染料也是有相当的局限性的，尤其是在多色流式实验时会更大概率出现荧光溢漏的问题。 例如，当使用 PerCP-Cy™5.5 染料时，我们可能认为只会在 488 nm 激发范围相关的通道中检测到信号，然而这实际上是错误的，因为该蛋白质会被 635