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- 上海研生
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- 2026年05月12日
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上海研生
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57
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详见说明书
KB供应商以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用 Countess®自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低 1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
资源名称 KB供应商
种属 人口腔表皮样癌细胞
形态 上皮样
培养方法
培养基 IMDM:Iscove＇sModiefiedDulbecco＇sMedium10%FBS
传代方法 1:4~1:10传代；2~3天换液1次。
生长特性 贴壁生长
存储条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
详细说明
传代情况 P368
支原体检测 培养法（-）
STR AmelogeninX；CSF1PO9，10；D13S31712，14；D16S5399，10；D18S5116；D19S43313，14；D21S1127，
具体操作：
1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械：保证足够的*作空间，不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液：大鼠主动脉平滑肌细胞取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
运输和保存：
KB供应商视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
布曲明进口/国产CA8 碳酶相关蛋白8体含量测定
拟人参皂苷F1l进口/国产UBAP1 泛相关蛋白1体（鼻咽癌相关因20蛋白）鉴别
GLUT4(Glucose transporter type 4)英文名称：Zic2G蛋白偶联受体48抗体
多索茶进口/国产CACNB1 钙通道电压依性β1蛋白体HPLC法含量测定用
野黄芩苷进口/国产UXT/Ubiquitously expressed transcript 广泛表达转录蛋白UXT体含量测定
GIP (Gastric Inhibitory polypeptide)英文名称：ZDHHC-18糖基转移酶GLT8D2抗体
乌拉地尔进口/国产CDK5RAP3 周期依性激酶5激活结合蛋白C53体HPLC法含量测定用
进口/国产WDR16 WD重复蛋白16体含量测定
ANGPTL2/ANG-2 (Angiopoietin-like Protein 2)英文名称：ZDHHC-12高尔基体外周膜蛋白p65抗体
KB供应商高端化学,固相合成, 4--2,6-二-3-硝
BR，1：250；250USPu/mg（1000BAEEu/mg）>97.0%(GC)1kgPPOX
Trop-2英文名称：Phospho-RSK2(Tyr529)Emerin蛋白抗体
高端化学,合成试, 连四硫钾
BR，1：250；250USPu/mg（1000BAEEu/mg）90%25gTrxR
TSHR英文名称：phospho-c-Raf (Ser259)细胞外信号调节激酶5抗体
高端化学,固相合成, 聚(3,4-亚二氧噻吩)-聚(烯磺)
USP级，1：2500；2500USPu/mg（BAEE1万u/mg）90%1gALA
TSHR (CT)英文名称：phospho-c-Raf(Ser296)磷酶/磷二酯酶家族成员5抗体
注意事项：
1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。
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文献和实验owen79 各位大侠好，小弟愚问一下，我想测定NF-KB活化后细胞核内的量，这需要提取核蛋白，但是蛋白量太少，提取出来能否测出NF-KB啊！thank you ! ronaldo_zj 1. 通过提取细胞核、细胞浆内的蛋白来行western blot检测NF-kappa B 的表达情况是可以的，因为很多时候是通过NF-kappa B转位来实现活化的，所以提取的时候我不知道楼主是自己配制试剂提取还是用试剂盒提取的，我建议
pmlt 我想做nf-kb的激活，请问如果我只用western 做Ikba和p-Ikba的半定量检测可以么？ 细胞因子 可以，做完WB后用Image软件经行成像分析，可以半定量检测。园子里有很多这方面的帖子，你可以看看。 doctormy pmlt wrote: 我想做nf-kb的激活，请问如果我只用western 做Ikba和p-Ikba的半
superskyfly 我自己都觉得我自己很牛，千百人都做出来的试验，我就是做不出来。质粒用的是Promega p4.32-NF-kB-Luc, 转染用的是Invitrogen的Lipofactamin, 激活用的是Sigma生产的PMA和PHA-P,Assay用的是Promega dual,结果加了PMA和PHA的和不加的读数几乎没有区别。加了compound的和不加的也没有区别。 用过PC3, Jurkat, A549，HCT116都是一样。
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