NEBuilder® 高保真 DNA 组装预混液 | NEB

产品特点

无论片段的长短和末端匹配性如何，NEBuilder^® 高保真 DNA 组装预混液都可以无缝组装多个 DNA 片段。该产品操作简单、灵活，以预混液形式提供，主要用于合成生物学和多片段的一步克隆。如需了解更多信息，请访问 NEBuilderHifi.cn。

• 也可提供更优惠的包含化学感受态细胞剂型。
• 克隆后无需反复筛选、重测序，真正实现无差错、高保真组装
• 灵活的序列设计（无缝克隆）
• 无需 PCR 纯化步骤
• 更高效地连接 DNA 片段，轻松应对更大片段或较低 DNA 起始量的组装
• 由于可去除 5´ 和 3´ 末端的错配序列，NEBuilder 高保真产品可进行连续组装。（省去耗时的 PCR 扩增步骤，节省时间）
• 使用合成的单链 DNA 寡核苷酸桥接两个双链 DNA 片段（如接头插入或 gRNA 库），简单快速
• 适用于起始量较低的 DNA
• 适用于多种 DNA 操作，包括定点突变
• 使用 NEBuilder 产品，无需技术使用许可费

NEBuilder 高保真 DNA 组装预混液可以高效、准确地组装 DNA 片段。不管片段的长短和末端匹配性如何，该方法都可以无缝组装多个 DNA 片段。还可以组装单链寡核苷酸或含 15-30 bp 重叠区的不同片段长度的 DNA 片段。此方法操作简单、灵活，以预混液形式提供，主要用于合成生物学和多片段的一步克隆。在同一反应缓冲液中有几种不同的酶活性（见图 1）：

• 核酸外切酶活性会产生单链 3´ 突出末端，促使互补的末端重复序列（重叠区）退火
• 聚合酶活性会填补退火片段的缺口
• DNA 连接酶活性能在组装后的 DNA 切刻处进行连接

最终形成双链闭合的 DNA 分子，可作为 PCR、RCA 的模板或其它分子生物学应用，包括直接转化大肠杆菌。
NEBuilder 高保真 DNA 组装试剂盒提供多种剂型：含 NEB 5-alpha 化学感受态细胞（克隆试剂盒，NEB #E5520），含 NEB 10-beta 化学感受态细胞（大片段组装试剂盒，NEB #E2623）；以及不含感受态细胞（预混液，NEB #E2621）。NEB 5-alpha 化学感受态细胞适用于小于等于 15 kb 片段的常规组装。 对于大于 15 kb 组装片段的转化，NEB 建议使用 NEB 10-beta E. coli 感受态细胞（高效级，NEB #C3019）或 NEB 10-beta E. coli 电转感受态细胞（NEB #C3020）。如果组装基因包含重复序列，应使用 NEB Stable E. coli 感受态细胞（NEB #C3040）。
NEBuilder 的应用：

• 定点突变
• sgRNA-Cas9 表达载体构建 | 视频
• 线性酵母表达框组装

为帮助您选择最佳 DNA 组装方法，请参考合成生物学/DNA 组装选择指南。
如需帮助设计用于 NEBuilder 的引物，请观看引物设计视频。
图 1：不同于一般的 DNA 组装试剂


备注：以上仅为 E2621 的部分产品信息，如需NEB货号 E2621 的完整产品信息及相关的实验操作手册等等，请通过NEB官网查找对应的货号获取。