NEBridge® 连接酶预混液 | NEB

产品特点

NEBridge^® 连接酶预混液可与多种 NEB IIS 型限制性内切酶搭配使用，进行高效率和高保真的 Golden Gate 组装，为使用者提供更多灵活和便利。

• 试剂盒经优化设计，适用于高效、准确的 Golden Gate 组装
• 3X 预混液剂型，使用便捷
• 搭配 NEB IIS 型限制性内切酶使用
• 用于无缝克隆 – 组装后不存在多余序列残留
• 适用于在单个反应中同时进行多片段（2-25+ 个）有序组装
• 也可用于单片段克隆和文库构建
• 登陆 GoldenGate.neb.cn 使用免费的在线工具
• 请试用免费的 Ligase Fidelity Tools 设计高保真 Golden Gate 组装

NEBridge 连接酶预混液为 3X 浓度剂型，适用于 Golden Gate 组装。该预混液专为搭配使用 NEB IIS 型限制性内切酶而设计，经优化的反应缓冲液含有 T4 DNA 连接酶和专有连接增强剂。用户只需选择 NEB IIS 型限制性内切酶，并添加要组装的 DNA 底物即可。该产品与其操作方案可支持简单的单片段插入，也支持中等复杂（3 – 6 个片段）和高度复杂（7 – 25+ 个片段）的片段组装。
备注：以上仅为 M1100 的部分产品信息，如需NEB货号 M1100 的完整产品信息及相关的实验操作手册等等，请通过NEB官网查找对应的货号获取。

图：使用 NEBridge 连接酶预混液和常规 T4 DNA 连接酶缓冲液对 lac 基因进行 25 个片段的 Golden Gate 组装



A：使用 NEBridge 连接酶预混液对 lac 基因进行 25 个片段的 Golden Gate 组装示意图

B：使用 BbsI-HF（NEB #R3539M）、24 个插入片段和 pGGAselect 质粒建立 30 µl 反应体系。左图平板为使用 10 µl NEBridge 连接酶预混液的结果。右图平板为使用 3 µl 10X T4 DNA 连接酶缓冲液（NEB #B0202）和 1 µl T4 DNA 连接酶（NEB #M0202T/M）的结果。两个反应分别加入 1 µl BbsI-HF，以及 24 个插入片段和 pGGAselect 质粒（每种 0.05 pmol）。反应按 37℃ 5 分钟和 16℃ 5 分钟的条件进行 60 个循环，最后以 60℃ 温育 5 分钟。每个反应取 2 µl 反应物转化到 50 µl T7 表达大肠杆菌感受态细胞（NEB #C2566）中。取 50 µl 复苏菌液涂到 LB 平板上（含 1 mg/ml 葡萄糖、1 mg/ml MgCl₂、30 µg/ml 氯霉素、200 µM IPTG 和 80 µg/ml X-gal），以 37℃ 温育 18 小时，以 4℃ 储存 4 小时，最后根据菌落颜色表型进行计数。

C：结果显示了总转化株数量和正确组装转化株（蓝色菌落）百分比的平均值（三个重复），以及平均值的标准偏差。使用 NEBridge 连接酶预混液时，每微克载体 DNA 产生 2.2±0.2X10⁶ 个正确组装的蓝色菌落，保真度为 94.3±1%，而使用 T4 DNA 连接酶缓冲液时，每微克载体 DNA 产生 8.3±2.1X10⁵ 个正确组装的蓝色菌落，保真度为 69.8±10.7%。