CRADD 敲除单克隆 ( Hela)

抗体敲除验证：捍卫实验标准 确保抗体特异性

Cell（KO 细胞）裂解液已经比较成熟。市面上销售的多种细胞系 Knockout Cell（KO 细胞）裂解液已经有上千种。如果您研究的目的基因正好有商业化 Knockout Cell（KO 细胞）裂解液，将节省您和大量的资源和宝贵的时间。以图为例 —— HER2 鼠单抗特异性的敲除验证：WT: Hela 野生型细胞裂解液 (OriGene Cat# LC810 HELA),KO: HER2-Knockout Hela 细胞裂解液 (OriGene Cat# LC810070),Western

【原创】基因组编辑三大工具ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9筛选基因敲除细胞系阳性克隆Protocol

这些方面的进展。关于这些技术的具体原理和操作细节，请查看我之前的帖子附件详细介绍。不清楚的请联系我咨询。此贴主要谈一谈在用这些技术进行癌细胞株阳性细胞克隆筛选的过程中，如何进行阳性克隆筛选，为初次接触这些新技术的研究者提供一些参考意见。一般CRISPER-Cas9质粒转染后，采用有限稀释法接种到96孔板中长克隆，待到单个细胞长到几百到1000个细胞左右时，显微镜下仔细观察每一个孔的细胞，若发现非单克隆的细胞需要将其标注出来剔除筛选之外。传两代后，取出单个克隆的一部分细胞提取基因组DNA。分析敲除位点

从G418筛选，转染到单克隆化的总结

我做了稳定转染，从G418浓度确定到最后的单克隆化鉴定。有自己的体会也有其他战友遇到的情况, 和大家分享. 没有总结好的地方，大家补充。 筛选之前确定G418浓度： 1，由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同，一般1g的粉剂中有效的G418含量大约为0.722g。 2，G418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。但是新霉素对真核细胞无作用而G418对细菌和真核细胞都起作用。neo就是编码