KO细胞株/基因敲除细胞株

KO（Knock Out, 基因敲除）细胞株是指通过基因编辑技术产生的目的基因不表达或某种功能彻底丧失的培养细胞。在抗体特异性验证、确定药物靶点、确定参与通路的基因等方面发挥重要作用。

基因敲除细胞详情：

细胞类型：肿瘤细胞、常规细胞系、IPS/ES等各类细胞

服务类型：单基因敲除、多基因敲除

周期/价格：4-6周/一万元起

交付结果：纯合子交付 1*10⁶细胞

 

技术优势：

 

高度精确：基因编辑允许在基因组的特定位置进行精确的修改。这种精确性减少了意外的基因变化或不良后果，提高了编辑的安全性和可靠性。

多功能性：基因编辑不仅可以用于敲除（删除）基因，还可以用于敲入（添加）或修复特定的DNA序列，提供了广泛的实验和治疗可能性。

快速经济：与传统的遗传工程方法相比，基因编辑更快速、更经济。它简化了基因修改的流程，减少了时间和成本。

 

1. 1. 细胞培养

准备培养条件：根据所使用的细胞类型，选择合适的培养基（如DMEM、RPMI等），并添加必要的补充物，如胎牛血清（FBS）、抗生素等。
消毒与无菌操作：在生物安全柜中进行所有操作，确保无菌条件。
细胞复苏：如果细胞是冻存的，需要在37°C水浴中迅速解冻，然后在无菌条件下转移到含有新鲜培养基的培养瓶中。
细胞培养：将细胞放置在恒温（通常为37°C）、含5% CO₂的细胞培养箱中，以促进细胞生长和分裂。
细胞传代：细胞生长到一定密度，需要定期进行传代，即将细胞从一个培养瓶转移到新的培养瓶中以继续培养。

1. 1. 转染

准备转染试剂：选择适合目标细胞类型的转染方法，如脂质体转染、电穿孔转染或病毒载体转染。
DNA/RNA准备：提取并纯化用于转染的DNA或RNA（如编码gRNA和Cas9的质粒或mRNA）。
转染混合物的制备：按照转染试剂的说明书，将DNA/RNA与转染试剂混合，孵育形成复合物。
细胞处理：在转染前，通常需要将细胞播种到适合的培养板中，并让它们生长到适当的密度。
添加转染混合物：将准备好的转染混合物添加到细胞培养板中。这通常在培养基中完成，并可能需要更换为无抗生素的培养基。
培养和观察：将细胞放回培养箱中，继续培养一定时间（通常24-48小时），观察转染效率和细胞状态。
后续处理：转染后，可能需要更换新鲜培养基，继续培养，直至进行后续的基因编辑验证实验。

1. 1. 筛选编辑细胞

细胞存活筛选：首先，需要确保转染后的细胞存活良好。这通常通过观察细胞的形态和密度来判断。
选择性标记：如果使用的基因编辑系统包括选择性标记（如抗生素抗性基因），则可通过添加相应的抗生素到培养基中筛选出成功转染的细胞。
单克隆培养：为了获得纯净的编辑细胞群体，可以通过限制稀释或细胞克隆形成实验，从单个细胞开始培养。

1. 1. 鉴定编辑细胞

PCR检测：提取细胞DNA，利用PCR扩增目标基因区域。通过比较编辑前后的PCR产物大小，可以初步判断是否发生了基因编辑。
测序分析：将PCR产物进行测序，以精确鉴定DNA序列上的改变。
限制性内切酶消化：如果基因编辑导致或消除了特定的限制性酶切位点，可以使用相应的酶处理PCR产物，然后通过凝胶电泳分析切割模式。
表型分析：对于功能性基因编辑，还可以通过观察细胞的表型变化来评估编辑效果，如生长特性、形态或蛋白表达的改变。
蛋白质水平验证：如果编辑影响了蛋白的表达或功能，可以通过Western blot或免疫荧光等方法在蛋白质水平上进行验证。