最低抑菌浓度MIC实验|抑菌试验|生物科研实验

最低抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration, MIC)​ 是指在规定的实验条件下，能够完全抑制待测微生物可见生长的最低样品(药物、抗菌剂、天然产物、防腐剂等)浓度。它是评价抗菌物质活性的金标准之一，广泛用于医药研发、食品安全、日化产品质控、农业生物农药研发等领域。

MIC检测不仅能提供定量抗菌效力数据，还可用于后续 MBC(最低杀菌浓度)、联合药敏试验及耐药机制研究的基础参数。

原理

MIC检测的核心原理是在标准化培养基与培养条件下，将待测样品按倍比稀释成一系列浓度梯度，分别与等量菌液混合，孵育一定时间后观察细菌/真菌的生长情况。

• 无可见生长的最低浓度即为MIC。
• 常用方法依据检测终点不同分为：

1. 肉眼观察法(肉汤稀释法)：通过培养基浊度判断生长与否。
2. 比浊法(分光光度法)：检测菌液OD值变化(OD增幅低于阈值视为无生长)。
3. 琼脂稀释法：将样品混入琼脂平板，点种菌后观察菌落形成情况。
4. 微量肉汤稀释法(96孔板法)：高通量、自动化兼容，适合大规模筛选。

对于某些特殊样品(如缓慢生长菌、厌氧菌)，可采用延长孵育时间或特殊气体环境。

仪器与试剂

1. 主要仪器

• 生物安全柜 & 超净台：无菌操作。
• CO₂培养箱 / 恒温培养箱：细菌一般 35–37℃，真菌 28℃。
• 酶标仪或多功能读数仪：检测OD值(比浊法)。
• 移液器 & 多通道移液器：精确稀释。
• 涡旋混匀器、离心机：菌液制备。
• 显微镜：确认菌液纯度与形态特征(可选)。

2. 关键试剂与耗材

• 标准菌株或临床分离株：如 Staphylococcus aureusATCC 6538、Escherichia coliATCC 25922、Candida albicansATCC 10231 等。
• 液体培养基：营养肉汤、MH肉汤(Mueller-Hinton Broth)、RPMI-1640(真菌)。
• 固体培养基：MH琼脂、沙氏葡萄糖琼脂(真菌)。
• 样品溶液：无菌过滤(0.22 μm)或适当溶剂溶解，需验证溶剂无抑菌性。
• 阳性对照药：如左氧氟沙星(细菌)、氟康唑(真菌)。
• 阴性对照：仅含菌液和培养基。
• 96孔平底微孔板(微量稀释法)。

样本类型及运输

1. 样本类型

• 化学药物/原料：粉剂、片剂(需溶解成溶液)。
• 天然产物/提取物：植物、微生物发酵液、海洋天然产物(需明确提取溶剂与浓度)。
• 消毒剂/防腐剂：液体成品或浓缩液。
• 抗菌材料浸提液：按标准比例制备(如 1 g材料 : 10 mL溶剂)。

2. 运输要求

• 液体样本：无菌密封，4℃短期保存;长期-20℃或-80℃冷冻，避免反复冻融。
• 固体样本：干燥密封，常温或4℃保存，标明成分与批号。

注意事项：

• 含有机溶剂的样本需确认对微生物无额外抑制作用。
• 提供样品浓度、纯度及溶剂信息，以便换算MIC单位。