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- 2026年01月29日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
Bovine IgG solution≥97% purity
- 规格：
1gm/10gm/100gm
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文献和实验一、实验目的1、初步掌握从血清中提取纯化IgG的方法步骤。2、了解辛酸-硫酸铵法纯化IgG 的原理。二、实验原理辛酸-硫酸铵法分两步进行。第一步用辛酸沉淀杂蛋白，辛酸为短链脂肪酸，在酸性条件下可沉淀血清或腹水中的白蛋白或其他非Ig蛋白质；第二步利用硫酸铵盐析将Ig沉淀下来，操作步骤如图3-10所示。经SDS-PAGE电泳检测能得到电泳纯度较高的Ig。三、仪器、原料和试剂1、仪器磁力搅拌器、离心机、低温冰柜。2、原料抗血清（兔抗鸡血清）。3、试剂(1) 乙酸-乙酸钠缓冲液：60mmol/L，pH
液迅速以1mol/L的NaHCO 3 液中和至pH 7.0，此即为提纯的IgG。 5．将收集的IgG液测定其蛋白含量、活性和纯度后，浓缩、分装、低温保存备用。 6．Sepharose－4B－SPA柱复生 采用7mol/L尿素洗柱后，再用生理盐水洗涤，最后用PBS液平衡后，可重复使用。 （四）结果判定 1．IgG的收集量。 2．IgG的纯度鉴定 可采用圆盘电泳或免疫电泳进行鉴定。 3．IgG的活性
，如以36％的饱和硫酸铵沉淀血清的产物即为优球蛋白，Euglobin，含γ球蛋白)。 10．过DEAE－纤维素层析柱。（装柱过程见层析技术）。以0.01Mol/L pH7.4PBS（0.03Mol/L NaCl）洗脱，收集洗脱液。 也可采用SephadexG150或G200柱。 11．蛋白质及其定量鉴定（见本章第八节）。 12．IgG的纯度鉴定 可采用下列方法之一鉴定。 ⑴ 区带电泳：玻片琼脂或醋酸纤维膜电泳均可。加样电泳后，只在γ—球蛋白
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