- ￥1228
- 翌圣生物
- 11004ES
- 中国
- 2026年10月26日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
冰袋（wet ice）运输。产品-20℃保存。有效期1年。
- 保质期：
有效期1年
- 供应商：
翌圣生物
- 英文名：
Hieff Mut® Multi Site-Directed Mutagenesis Kit 多点突变试剂盒
- 库存：
大量
- 规格：
10 T(11004ES10)
产品描述：
Hieff Mut™ Multi Site-Directed Mutagenesis Kit 是基于Hieff Clone® 快速克隆技术的定点突变系统。使用本试剂盒，可一次性向目标质粒上三至五个不连续位点（相距超过50bp）同时引入定点突变。该试剂盒由两个模块组成：Hieff® II Pfu DNA Polymerase扩增模块和Hieff Clone® 快速克隆模块。Hieff® II Pfu DNA Polymerase超高的保真度显著降低了扩增过程中引入新突变的可能性，其卓越的长片段扩增能力，广泛适用于长度小于20 kb的任何质粒扩增。Hieff Clone®快速克隆系统利用高效的同源重组反应替代传统的退火成环反应。因此使用Hieff Mut™ Multi Site-Directed Mutagenesis Kit进行DNA定点突变时，引物设计更加灵活，且扩增反应以指数方式进行，极大减少了模板使用量，有利于原始甲基化模板的彻底降解。
Hieff Mut™ Multi Site-Directed Mutagenesis Kit中的重组酶Exnase MultiS经过优化，专门针对多碱基进行定点突变。此外，如扩增产物特异，其DpnI消化产物可不进行DNA纯化而直接用于重组反应。高度优化的反应缓冲液、快捷的操作流程以及极高的成功率，使得Hieff Mut™ Multi Site-Directed Mutagenesis Kit成为DNA多点突变试剂盒。
产品属性：
| 热启动 | 否‑ |
| 退火温度 | 60-72℃‑ |
| 保真度 | 83倍‑ |
| 产品形式 | Kit‑ |
| 应用 | DNA定点突变、多点突变‑ |
| 延伸时间 | 30-60s/kb‑ |
| 反应速度 | 20-50min‑ |
| 电泳指示剂 | 否‑ |
产品特色：
- 专门针对多碱基进行定点突变
应用案例：
- 不连续多碱基（相距超过50bp）定点突变实验流程（以不连续三碱基为例）
储存条件：
冰袋（wet ice）运输。产品-20℃保存。有效期1年。
常见问题：
Q:多点突变试剂盒与定点突变试剂盒有什么区别？
A:多点突变试剂盒可一步实现目标质粒上 3-5 个不连续位点的定点突变，而定点突变试剂盒是
适合 1 或 2 个不连续位点的定点突变。
如：3 个连续的碱基突变算 1 个位点的突变，故定点突
变试剂盒即可（相距超过 50 bp 为 1 个不连续位点）。
Q:点突变为什么要选择甲基化的载体？
A:点突变过程需要去除模板质粒，防止假阳性。利用的原理就是限制性内切酶DpnI 能消化甲基化的模板，若是非甲基化，则无法去除模板。
Q:对于 PCR 模板质粒什么要求？
A:a）PCR 模板应为甲基化质粒，应使用甲基化酶无缺陷型的宿主菌扩增原始质粒（如DH5α， TOP10，JM109 等）。
b）应尽量使用新鲜制备的质粒作为模板，因长期放置，反复冻融可能会导致模板质粒断裂， 开环或降解。
Q:质粒反向扩增时引物如何设计？
A:正反向扩增引物 5’端包含至少 20 bp 反向互补区域，各引物非互补区域长度至少为 20 bp。互补区尽量选择无重复序列，GC 含量尽量在 40%-60%范围内。
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作用位点等，单点突变不能满足实验的需要，重复进行单点突变也非常浪费时间。因而Stratagene公司又推出了QuikChange Multi Site-Directed Mutagenesis kit。最多一次实验可以引入5个定点突变。这个试剂盒的原理和Clontech的相似，就是准备多个带突变的引物（同方向，对同一单链模版），退火后全部突变引物（不超过5个）都结合在同一环状单链模版，PfuTurbo聚合酶延伸，碰到下一个引物就停止，各片断经连接成环，和单链模版组成杂和环，DpnI消化双链模版，也消化杂和环
合成的突变质粒不被切开从而除去原来的模版质粒。虽然这个试剂盒比上一个麻烦，但实际上是引入了两个定点突变。只不过一个用于酶切除掉模版的反应。 有的时候研究可能需要多个位点的定点突变，比如改造酶的活性或者动力学特性，研究蛋白之间的相互作用位点等，单点突变不能满足实验的需要，重复进行单点突变也非常浪费时间。因而Stratagene公司又推出了QuikChange Multi Site-Directed Mutagenesis kit。最多一次实验可以引入5个定点突变。这个试剂盒的原理
了两个定点突变。只不过一个用于酶切除掉模版的反应。（3）多位点定点突变有的时候研究可能需要多个位点的定点突变，比如改造酶的活性或者动力学特性，研究蛋白之间的相互作用位点等，单点突变不能满足实验的需要，重复进行单点突变也非常浪费时间。因而Stratagene公司又推出了QuikChange Multi Site-Directed Mutagenesis kit。最多一次实验可以引入5个定点突变。这个试剂盒的原理和Clontech的相似，就是准备多个带突变的引物（同方向，对同一单链模版），退火后全部突变
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