敲除细胞株构建

构建多基因敲除动物模型，一切如此简单

我们实验室在细胞信号转导方面技术非常强，但因为没有动物体内的结果，每次发表的文章档次大打折扣。我的导师因此决定要我构建基因敲除小鼠，来验证一些体外研究结果。由于我们是一个传统的cellular biochemistry实验室，对基因敲除小鼠技术的了解，仅限于书本知识，实践起来完全不够用。这样的课题对我来说几乎是impossible mission，但哪怕最终只有0.1%的成功概率，我也不想放弃，万一成功了呢？ 我们前期研究发现，一个內源多肽的受体家族由A,B,C三个基因组成，在小鼠

如何在构建敲除细胞株时利用好CRISPR/Cas9技术？

从2013年1月份开始到现在，近2年的时间里，CRISPR/Cas9技术的应用领域被来自全球优秀的科学家们不断的扩大。其中包括基因敲除，定点突变，定点整合，基因沉默，基因定位和CHIP等多个领域，而且这个技术的应用领域还在不断的被扩大。 笔者基于多年的基因重组经验（系统的研究过ZFN / IOS / TALEN / CRISPR重组技术），以及采用CRISPR/Cas9技术构建超过50多个株系的经验，重点谈一谈构建敲除细胞株系时，如何利用好CRISPR/Cas9技术。 相比于其它重组

真相揭秘 | 为什么构建稳定表达细胞株这样难？

1）Flp-In系统   产生背景 随着新技术的不断革新，针对真核质粒转染构建稳定表达细胞株的方法也不断地创新，出现了TALEN、IOS、Cas9和Flp-In等技术，不断地提高稳定表达细胞株构建的成功率。 Flp-In系统——以其独特的优势，广泛应用于构建过表达或静默特定基因的稳定表达细胞株，用于特定基因的功能研究。Flp-In系统依据酿酒酵母的DNA重组系统的特点，高效构建稳定哺乳动物表达细胞株。这种DNA重组系统应用重组酶（Flp）和定点重组技术，将目的基因插入到哺乳动物指定的基因组中