- ￥250
- 福建厦门
- 2026年01月05日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称：
免疫荧光鉴定
- 规格：
样
本项目利用免疫荧光染色技术，采用细胞培养和组织样本处理试剂盒对客户提供的样本进行预处理，通过固定、渗透、封闭等步骤，对样本进行准备。接着，使用针对特定抗原的一抗进行孵育，随后利用荧光标记的二抗进行检测。通过荧光显微镜进行图像采集，使用专业的图像分析软件处理采集到的荧光图像，对荧光信号进行定性评估或定量分析，以确定抗原在样本中的表达情况和分布模式。
. 实验步骤
.1 细胞爬片
取3片玻璃片于24孔板中，每孔加入培养基1mL，加入细胞0.02million个/孔。置培养箱2h或过夜。
.2 细胞染色
（1）吸去培养液，用PBS洗1-2遍。
（2）固定
加入4% PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次。也可最后一次不吸出PBS，放4℃过夜。
（3）破膜
爬片稍甩干后用组化笔在盖玻片中间细胞分布均匀的位置画圈（防止抗体流走），加50-100μl破膜工作液，室温孵育20min，PBS洗3次，每次5 min。（如果是膜蛋白染色，则不做破膜处理）
（4）封闭：
在圈内滴加用3%BSA均匀覆盖组织，室温封闭30min。
（5）一抗孵育
一抗配制：抗体与PBS 1:100（200）稀释。
破膜封闭后，取50uL一抗于防水膜上（湿盒中），湿盒内4°C孵育过夜。
（6）二抗孵育
去除抗体工作液，PBS洗3x5min/次。室温避光孵育二抗（二抗:PBS=1:500）2h。
（7）DAPI复染细胞核
去除抗体工作液，PBS洗3x5min/次。滴加DAPI（DAPI:PBS=1:1000）室温避光孵育5min。
（8）封片
PBS洗3×5min/次，玻片上各滴1滴Fluoromount-G，将有细胞的一面盖上。
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文献和实验、 miRNA靶基因的验证与miRNA靶基因 的预测方法相比，对miRNA靶基因进行实验验证的方法并不多，目前还没有一个快速、简便、高通量的鉴定方法。最直接的鉴定方法是， 利用荧光定量PCR及Westernblot方法分别检测转染或敲低miRNA后细胞中mRNA水平及蛋白水平的变化，从而确定miRNA与靶基因的对应关系。这种方法能够直接鉴定出miRNA的靶基因， 准确度高但不能鉴定miRNA的靶位点。转染或敲低miRNA：方式主要有两种，一种是构建miRNA过表达载体的稳定表达系统，一种是人工合成miRNA
固定和透化 在培养板中将已爬好细胞的盖玻片用 1 × PBS 浸洗 3 次，每次 3 min。 用 4% 的多聚甲醛固定爬片 15 min，1 × PBS 浸洗玻片 3次，每次 3 min。 0.5%Triton X-100(1× PBS 配制 )室温通透细胞 15 min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）, 1 × PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min。 封闭 吸水纸吸干 1 ×PBS，在玻片上滴加 5% 的正常血清（与二抗种属来源一致或相似），室温封闭 1 h
关于如何鉴定收到的新细胞是否有污染，很多站友，特别是新接触细胞培养的站友通常没有太多经验，在此我分享下我这边接收到新细胞后是如何判断是否有污染的。一、肉眼观察以下几项：1. 细胞瓶身：如果瓶身上没有裂缝，正常；如果瓶身上有裂缝，则污染几率非常大。2. 培养基颜色：如果培养基颜色是红色或者粉色，正常；如果是橙色，则可能是污染或者细胞过密；如果是黄色，则污染几率非常大。3. 培养基澄清度：如果培养基澄清，正常；如果有少许漂浮物，则可能是污染或者有细胞凋亡；如果培养基很浑浊，甚至出现絮状物，则污染
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