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iPSC(诱导多能干细胞)和ESC(胚胎干细胞)的基因敲除技术在现代医学研究中具有重要应用,以下是关于iPSC基因敲除的主要内容:
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iPSC基因敲除的应用:
- 疾病建模:通过将患者体细胞重编程为iPSC,并进行特定基因的敲除操作,可以模拟患者的遗传疾病状态,有助于深入了解疾病的发病机制,为疾病的治疗提供新的思路和方法。例如,在神经退行性疾病、心血管疾病等领域,基因敲除iPSC模型已成为研究疾病发生和发展过程的重要工具。
- 药物筛选和疗效评估:利用基因敲除iPSC模型,研究人员可以测试不同药物对疾病状态细胞的影响,从而筛选出潜在的治疗药物。这种方法不仅可以提高药物筛选的效率,还可以降低药物研发的成本和风险。
- 再生医学:通过敲除特定基因,可以优化iPSC分化为特定功能细胞的能力,为细胞治疗提供更优质的细胞来源。例如,在心血管疾病治疗中,可以利用基因敲除iPSC技术制备具有特定功能的心肌细胞,用于修复受损的心肌组织。
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iPSC基因敲除的优势:
- 解决供体来源问题:iPSCs的初始来源细胞可以提取于供体的皮肤、血液以及尿液等样本,容易获取,且诱导后的具有长期增殖的能力,能够提供足够的细胞进行下游实验或功能细胞的分化。
- 排除免疫排斥的风险:iPSCs可来源于患者自身的体细胞,能够实现患者自体细胞个性化治疗,可以完全避免异体移植所带来的免疫排斥风险。
- 规模伦理争议:细胞获取无需胚胎操作,彻底解决了伦理争议问题,符合现代科学发展的道德标准。
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iPSC基因敲除的实验流程:
- 构建基因敲除、点突变和敲入iPSC,可为多种疾病的发生和治疗提供有效的研究模型。但iPSC基因编辑细胞的构建是个耗时的过程,特别是单克隆细胞的筛选,费事费力;而且想要最终拿到基因编辑效果彻底的iPSC并不容易,例如在构建的过程中,细胞培养条件的稍不注意便可能导致iPSC的分化
检测项:细胞活率、基因型、细胞形态、支原体检测;可选:核型、脱靶-预测、脱靶-WGS、STR、干细胞标志物、流式/qPCR 表达检测、畸胎瘤、三胚层分化
交付内容:建系报告:两株 iPSC 克隆,1*10^6/管细胞,半年内免费提供 1 管。
交付周期(天):90-180
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文献和实验一.概述:基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术,是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA 同源重组原理,用设计的同源片段替代靶基因片段,从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展,除了同源重组外,新的原理和技术也逐渐被应用,比较成功的有基因的插入突变和iRNA ,它们同样可以达到基因敲除的目的。二.实现基因敲除的多种原理和方法:1.利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA 同源重组原理发展起来的。80
以最火热的 p53 为例Step1 先找 p53 基因序列1. NCBI--输入 p53 并选择物种 human:tumor protein p53 [Homo sapiens (human)]https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene2. Ctrl+F,输入 sequence,快速定位(当然其实拉下去就是了),点击 Genebank3. 下载 p53 基因序列4. 用 SnapGene 软件打开序列,并简单了解每个元件最好是可以学一下 SnapGene 这个软件的使用
敲除的没法搞,因为老鼠几乎不会活,所以从这个角度讲,2楼的兄台还是有一定道理的! 洄游的鱼 大鼠基因敲除研究才刚刚开始,肯定是没有的。前面几位说的对,TLR全部敲除?有20多种TLR呢,可能还有新的,怎么做啊? AME Jackson Lab have TLR 2,3, 4 mutation mice. http://jaxmice.jax.org/jaxnotes/archive/498i.html
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