耳蜗组织解离试剂盒

产品简介: 

品牌：bestopcell/百奥益康  

货号：BA3321 

产品名称：耳蜗组织解离试剂盒 

产品规格：10 rxns 

品牌介绍: 

  北京百奥益康医药科技有限公司是一家专注单细胞分子检测创新技术及临床转化应用的国家高新技术企业，由中国科学院科学家、海归科学家、临床专家、国内知名高通量检测资深研发专家联合创立，核心团队在单细胞分子检测领域深耕近10年，在单细胞分子检测技术创新、大数据智能分析与临床转化方面具有丰富经验。 

 

在高通量单细胞测序实验中，制备出高质量的单细胞悬液是实验成功的关键，百奥益康团队累积了10,000+个样本的单细胞测序服务经验，涉及150+种不同类型的组织，具有丰富的新鲜组织解离的经验。在此基础上，百奥益康自主研发了耳蜗组织解离试剂盒，利用该试剂盒，可高效的制备出耳蜗组织高质量的单细胞悬液。

 

产品优势

 

操作便捷：操作简单便捷，可轻松实现耳蜗组织的解离，制备出高质量的单细胞悬液。

活性较高：利用该试剂盒制备的单细胞悬液活性较高，结团率较低。

应用场景：适用于人、小鼠等哺乳动物耳蜗组织单细胞悬液制备，可用于单细胞测序、 细胞培养或其他细胞相关检测。

 

测试效果

我们对新鲜的小鼠耳蜗组织进行了实验，结果显示利用耳蜗组织解离试剂盒解离后获得的细胞悬液质量较好，能满足单细胞转录组测序实验。

 

测试流程：

 

 

 

 

测试结果：

利用耳蜗组织解离试剂盒制备的耳蜗组织细胞悬液质检结果

 

 

项目实测

目前我们已完成大量用该解离试剂盒处理的样本的单细胞测序项目。

 

 

部分项目实测耳蜗组织解离后数据表现

 

 

 

 

 

部分项目实测耳蜗组织解离后单细胞测序分群表现

注：数据均经对应项目的客户同意后发布

 

 

产品 FAQ

 

1.    Q：这款试剂盒仅适用于新鲜耳蜗组织吗？对冻存后复苏的耳蜗组织是否有效？

A：试剂盒主要适用于哺乳动物新鲜耳蜗组织（如小鼠、大鼠、人耳蜗组织），对冻存后复苏的耳蜗组织需谨慎使用：冻存过程中耳蜗内敏感细胞（如毛细胞、支持细胞）易因冰晶损伤破裂，复苏后解离的细胞活性会比新鲜组织低 25%-35%，需通过台盼蓝染色提前质检（活性≥55% 方可使用）。

 

2.    Q：说明书要求切取 200mg 新鲜耳蜗组织，若组织量不足（如 80mg）或过多（如 250mg），会影响解离效果吗？该如何调整操作？

A：会影响效果。①组织量不足（＜150mg）：耳蜗组织中目标细胞（如毛细胞）本身含量低，量不足会导致最终单细胞得率极低（不足正常量的 40%），且后续离心分层时细胞沉淀不明显，易造成收集遗漏；建议将多份 80mg 耳蜗组织合并（总重量凑至 180-200mg），按常规用量添加解离液，确保目标细胞总量满足实验需求。②组织量过多（＞220mg）：5mL 离心管内空间有限，组织无法充分剪碎和分散，酶解液难以均匀作用于所有细胞，会出现局部组织未解离、局部细胞过度消化的情况；需分两管处理，每管组织量控制在 180-200mg，每管对应 240μL 解离液 + 2760μL RPMI 1640 培养基，避免因组织拥挤影响酶解效率。

 

3.    Q：耳蜗组织含毛细胞等敏感细胞，步骤 3 消化时间为 0.5-2 小时，如何确定最佳消化时间？若消化时间不当，对敏感细胞会有什么影响？

A：最佳消化时间需结合 “显微镜质检” 动态判断，建议每 15 分钟观察一次：①当视野中 80% 以上细胞呈单个分散状态、无明显 5 个细胞以上的团块，且台盼蓝染色显示活性≥70% 时，立即终止消化；②若观察到毛细胞（呈柱状、有明显纤毛结构）开始出现肿胀或破裂，即使未到最短消化时间（0.5 小时），也需终止。消化时间不足：组织碎片多，毛细胞等目标细胞仍包裹在组织中，单细胞得率低；消化时间过长：敏感细胞（如毛细胞、螺旋神经节细胞）会因酶解过度导致细胞膜破裂，活性骤降，后续实验（如单细胞测序）中目标细胞占比不足 30%，无法满足研究需求。

 

4.    Q：步骤 5 和 6 需用 70μm 细胞筛过滤并涮洗离心管 3 次，若省略 1 次涮洗或用 50μm/100μm 筛网替代，会对耳蜗细胞悬液产生什么影响？

A：省略 1 次涮洗会导致约 1/3 的耳蜗目标细胞（如毛细胞、支持细胞）残留于离心管内壁，最终得率降低 30% 以上 —— 耳蜗细胞本身数量少，且易吸附在管壁，3 次涮洗是确保细胞充分回收的关键。不可用 50μm 或 100μm 筛网替代：①50μm 筛网孔径过小，虽能过滤组织碎片，但会截留部分较小的耳蜗细胞（如螺旋神经节细胞，直径约 8-12μm），导致目标细胞流失；②100μm 筛网孔径过大，无法有效过滤未消化的耳蜗组织碎片（如基底膜碎片），这些碎片会随细胞进入后续步骤，干扰细胞计数准确性，还可能堵塞单细胞测序芯片的微通道，影响实验进程。

 

5.    Q：说明书提到 “DMEM 培养基可替代 RPMI 1640 培养基”，替代后是否需要调整离心参数或消化时间？两种培养基对耳蜗敏感细胞（如毛细胞）的活性影响有差异吗？

A：替代后无需调整离心参数（仍为 4℃、300×g 离心 5 分钟）和消化时间。DMEM 与 RPMI 1640 均为哺乳动物细胞常用基础培养基，虽在葡萄糖、氨基酸含量上有差异，但均能为耳蜗组织解离提供适宜的渗透压（280-320mOsm/kg）和 pH（7.2-7.4），对酶解效率无影响。对耳蜗敏感细胞活性的影响极小：实验数据显示，用两种培养基解离小鼠耳蜗组织后，毛细胞活性差异≤6%，支持细胞、神经细胞活性差异≤5%，可根据实验室现有库存选择；若后续需进行耳蜗细胞培养，建议优先选择与培养体系一致的培养基，减少细胞因环境变化产生的应激反应。

 

6.    Q：耳蜗组织解离液需 -20℃保存，若运输过程中冰袋融化，试剂在 4℃环境下放置了 2 小时，还能继续使用吗？反复冻融会对解离液中的酶活性产生什么影响？

A：4℃放置 2 小时可继续使用，但需立即放回 -20℃，且使用前需充分混匀 —— 解离液中的酶类（如胶原酶、透明质酸酶）在 4℃短期放置（≤2 小时）活性损失≤10%，仍能有效破坏耳蜗组织的细胞外基质，不影响解离效果。反复冻融会导致酶活性显著下降：冻融 1 次，酶活性降低 12%-15%；冻融 3 次以上，活性不足 50%，无法充分分解耳蜗组织中的纤维成分，解离后仍有大量组织碎片，目标细胞（如毛细胞）释放量减少 60% 以上，无法满足实验需求。建议收到试剂盒后，将 2×1.25mL 解离液分装为 250μL / 管（单管对应 1 次实验用量），密封后 -20℃保存，每次实验取 1 管，避免反复冻融。

 

7.    Q：步骤 8 和 9 离心参数为 “4℃，300×g 离心 5 分钟”，若实验室只有垂直离心机或离心转速错误（如 200×g、400×g），会对耳蜗细胞产生什么影响？能否用室温离心替代 4℃离心？

A：垂直离心机无法替代水平离心机，垂直离心机的离心力方向与离心管垂直，会导致耳蜗细胞沉淀不均匀，易出现沉淀松散或贴壁，弃上清时易吸走敏感细胞（如毛细胞）；水平离心机能让细胞均匀沉淀在管底，便于精准收集。参数错误的影响：①转速 200×g：离心力不足，耳蜗细胞（尤其是毛细胞）无法充分沉淀，随上清流失，得率降低 45% 以上；②转速 400×g：离心力过大，会挤压脆弱的毛细胞和神经细胞，导致细胞膜破裂，活性下降 30%-35%。室温离心不可替代 4℃离心，室温会加速耳蜗细胞代谢，且残留酶解液在室温下活性增强，进一步损伤敏感细胞，4℃离心能维持细胞低代谢状态，减少活性损失，确保目标细胞质量。

 

8.    Q：质控后要求 “立即进行后续实验”，若无法立即开展，制备好的耳蜗单细胞悬液可短期保存吗？保存条件和时间有什么严格限制？

A：可短期保存，但条件极为严格：需在 4℃避光密封保存，时间不超过 30 分钟，且全程避免反复摇晃或震动。保存时需用含 5% FBS 的 PBS 将细胞浓度调整至 1×10⁶-1×10⁷ cells/mL，置于低吸附离心管中，防止细胞贴壁或受机械力损伤。超过 30 分钟后，耳蜗敏感细胞（如毛细胞）活性会快速下降（每 30 分钟下降 15%-20%），且易出现细胞结团；若保存超过 1 小时，毛细胞活性可能低于 50%，无法用于单细胞测序、细胞功能检测等高精度实验。使用前需重新进行台盼蓝染色质检，活性≥65% 且单细胞比例≥80% 方可使用，同时轻轻吹打 3-5 次（避免剧烈吹打损伤毛细胞纤毛），分散轻微结团的细胞。

 

9.    Q：与本品牌通用组织解离试剂盒（BA3303）相比，这款耳蜗专用试剂盒的核心优势是什么？能否用 BA3303 替代本产品解离耳蜗组织？

A：核心优势体现在 “针对耳蜗组织特性的酶解体系优化”：①酶浓度更低（BA3321 解离液酶浓度仅为 BA3303 的 60%），避免过度消化损伤敏感细胞；②添加毛细胞保护成分（如低浓度抗氧化剂），能减少解离过程中毛细胞的氧化应激损伤，毛细胞回收率比 BA3303 高 40% 以上；③酶解时间适配性更强，无需大幅调整即可平衡组织解离效率与细胞活性。不可用 BA3303 替代，BA3303 为通用型试剂盒，酶浓度和成分针对普通组织设计，用于耳蜗组织时，易导致毛细胞、螺旋神经节细胞大量死亡，活性不足 30%，且组织解离不彻底，无法获得满足实验需求的单细胞悬液，必须使用耳蜗专用的 BA3321 试剂盒。

订购须知: 

1）所有产品仅可用于科研目的的生物学实验（forresearchuseonly），严禁用于人体或动物的医疗目的