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再康生物
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0.5 mL
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文献和实验脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液 【配制方法】 把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节 每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH试纸检测),把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释,在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50
,从1mM 到 3mM,间隔 0.5mM 进行一系列反应,确定对于每个模板和引物对的最佳镁离子浓度。 耐热聚合酶 酶量过多 以 0.5U 为间隔适当减少酶量 退火温度 退火温度过低 适当提高退火温度或采用二阶段温度法 PCR 循环次数 PCR 循环次数过多 减少 PCR 循环次数 操作多份样品时,制备反应混合液,先将 dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的精确度; 最后加入反应模板
; M. pirum) PCR reagents : Taq polymerase ( 5 U / ul ) dNTP( dGTP, dCTP, dTTP, dATP, 1.25 mM each ) 10x PCR buffer (with 1.5mM MgCl2) 25mM MgCl2 sterile ddH2O Machine / Equipment: PCR thermal cycler agarose电泳设备 DNA电泳胶体观察设备 无菌PCR反应管 无菌1.5 ml
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