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文献和实验技术丨化学发光免疫分析中羧基与Tosyl磁珠包被抗体方法及注意事项
羧基和甲苯磺酰基磁珠相关的抗体包被的方法以及影响因素。 化学发光操作步骤羧基和甲苯磺酰基(Tosyl)磁珠的对比 ※ 羧基磁珠反应原理 羧基和EDC反应活化,形成中间体,中间体和抗体的氨基反应,将抗体连接在磁珠表面。 ※ Tosyl磁珠反应原理 抗体根据自身的疏水性逐渐和疏水的Tosyl基团靠近,达到合适距离后,抗体所携带的氨基和Tosyl基团发生自然反应,将抗体连接在磁珠表面。 ※ 包被条件对比 _ Tosyl磁珠 羧基磁珠 活化
1.生物磁珠具有小尺寸效应和表面效应,能够用高效DNA提取,满足微量生物样本DNA提取的要求。 2.磁珠表面能够进行化学修饰,从而与DNA进行特异性吸附,去除样品DNA溶液中的抑制物质,如:有机溶剂、去污剂、金属离子、燃料等。 3.生物磁珠表面功能团数量可以控制获得可提取DNA溶液的浓度信息,实现定量的要求。 4.生物磁珠可以通过特殊的合成工艺使其具有超顺磁特性,因此,能够通过仪器进行自动化操作,满足数据库建设对大批量样本提取的需要,减少人为因素。 5.用时少,操作
模抽提,但其不足之处是纯度(蛋白质残留) 不够稳定,蛋白质的沉淀效率在4℃会更好一些。三、离心柱法离心柱纯化法,是目前试剂盒提取广泛应用的方法。其最大特点是受人为操作因素影响小,纯度的稳定性很高(虽然纯度不一定比PC 纯化方法更高)。加入的液体通过离心后会进入另外一个离心管中,与含有核酸的柱子完全是分开的,所以洗涤更彻底。其致命弱点是样品过量,提取效率较低,且需要反复离心,操作复杂,成本也较高。四、生物磁珠法生物磁珠法是将纯化介质包被在纳米级生物磁珠表面,通过介质对核酸的吸附,在外加磁场下使核酸附着
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