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上海再康
㊣Annexin Ⅴ凋亡检测试剂盒
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发育凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin Ⅴ是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin Ⅴ被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。在细胞发育凋亡时，膜磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的变化。因为细胞坏死时也会发生膜磷脂酰丝氨酸外翻，所以Annexin Ⅴ常与鉴定细胞死活的核酸染料（如PI）合并使用，来区分凋亡细胞与死亡细胞。
Annexin V-Phycoerythrin (PE) Recombinant Protein公司拥有Annexin Ⅴ的专利权，可提供各种规格的Annexin Ⅴ凋亡检测试剂。其中Annexin ⅤFITC试剂盒中包含FITC标记的Annexin Ⅴ及PI，此凋亡试剂盒质优价廉，且有小包装，适于检测小样本的客户；
以Annexin Ⅴ FITC试剂盒为例进行以下说明：
试剂盒组份：
● FITC标记的Annexin Ⅴ
● PI染料（20ug/ml）
● 结合缓冲液
注意事项：
● 保证细胞的状态，避免出现过多的死亡细胞
● 操作过程避免过度用力，以免出现机械性细胞死亡
● 使用去离子水准备所需溶液
● 2-4℃避光保存试剂盒
● 使用一次性吸头，避免出现交叉污染
Annexin V-Phycoerythrin (PE) Recombinant Protein基本操作
● 按照既定程序诱导细胞凋亡
● 按照 说 明 书 配制所需容溶液
● 讲细胞悬浮在1×结合缓冲液中，浓度调整为2-5×10５/ml
● 将细胞悬浮液和FITC标记Annexin Ⅴ混合，温室孵育10分钟
● 离心，PBS洗涤细胞；使用1×结合缓冲液重悬细胞
● 使用PI染色细胞（终浓度为1ug/ml）
● 使用流式细胞仪分析
Annexin V-Phycoerythrin (PE) Recombinant Protein
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编号 中文 英文名称 规格25毫升/株.
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文献和实验择？ A：第一步考虑流式细胞仪配置，第二步考虑细胞自发荧光。对于本身有荧光的细胞（如转染了荧光蛋白基因的细胞或者药物孵育的细胞），特别是培养时间久或药物处理的细胞，一定要注意细胞代谢物和药物的荧光。一般来说，细胞代谢物的荧光会干扰 FITC/PE，所以建议用 Annexin V-APC，药物的干扰可查看药物本身的发射光谱是否会对检测选择的染料有影响。 Annexin V-APC 与 7-AAD 两种染料之间补偿干扰很小，染色操作简单，实验准确。 7-AAD 染料相比于 PI 染料粘稠度小，可减少检测
Phycoerythrin conjugation protocol
). Begin collecting 1.0 ml fractions when pink band approaches bottom of column and continue for 10 fractions after it has disappeared. Measure OD280 and OD565 - the former is protein, the latter the PE absorption peak. Test activity
磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中（图3）。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素（FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（propidine iodide, PI）是一种核酸
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