伊文思蓝染色液（0.5%） 0.5% Evan’s Blue

产品说明：

伊文斯兰(Evans Blue)又称偶氮蓝。伊文斯兰与台盼蓝都是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞因有外排功能而无法被伊文斯兰染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞与活细胞，但无法区分死亡与坏死。

操作说明：（仅供参考）

(一)血脑屏障通透性

1、 取处理后的实验动物(以小鼠为例)，静脉注射 Evans Blue Stain (0.5%)，小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1h 后处死小鼠，取目的脑组织。

2、 脑组织置于 1.5ml 离心管中，加入 1ml PBS， 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆, 离心。

3、 取上清，加入等量，4℃孵育。该步骤亦可采用如下操作: 取上清，按上清:=3:7比例加入，室温孵育 24h。

4、 离心 15min。

5、 取上述溶液，用分光光度计测 620 nm 处吸光值(OD 值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的 OD 值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测样品的伊文斯兰含量。

(二)活细胞染色

1、取 100μl 重悬细胞到常规离心管内，入 100μl Evans Blue Stain 轻轻混匀染色(染色时间可适当延长，但不宜超过 10min)。

2、吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数 500 个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下：细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100%

注意事项：

1、 Evans Blue Stain 对人体有轻微毒性，请小心防护。
2、 细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。
3、 血脑屏障通透性实验中，Evans Blue Stain 注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。
4、 最好采用低温冷冻离心机进行离心。
5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

T-1824 or Evans blue, often incorrectly rendered as Evan's blue, is an azo dye that has a very high affinity for serum albumin. Because of this, it can be useful in physiology in estimating the proportion of body water contained in blood plasma. It fluoresces with excitation peaks at 470 and 540 nm and an emission peak at 680 nm.

Evans blue dye has been used as a viability assay on the basis of its penetration into non-viable cells, although the method is subject to error because it assumes that damaged or otherwise altered cells are not capable of repair and therefore are not viable.

Evans blue is also used to assess the permeability of the blood–brain barrier to macromolecules. Because serum albumin cannot cross the barrier and virtually all Evans blue is bound to albumin, normally the neural tissue remains unstained. When the blood–brain barrier has been compromised, albumin-bound Evans blue enters the CNS.