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10000
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1年
- 供应商:
上海再康
- 保存条件:
室温保存
产品包装:试剂盒组成 D1800-50 D1800-100 储存条件
RNase A 1ml 2ml -20℃
蛋白酶K 1ml 2ml -20℃红细胞裂解液 120ml 120ml×2 RT
溶液A 15ml 2 5ml RT溶液B 15ml 25ml RT快速考马斯亮蓝染色液(R-250型)
漂洗液 15ml 15ml×2 RT洗脱液 15ml 30ml RT
吸附柱 50个 100个 RT收集管 50个 100个 RT 说 明 书 1份 1份 RT
注意事项:
1、本试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。
2、常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等,需注意的是,如欲制备大分子量血液基因组DNA,可优先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝,因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时,有PCR扩增抑制现象。
3、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DN**段较小且提取量也下降。
4、如果试剂盒中的溶液快速考马斯亮蓝染色液(R-250型)出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。
5、绝大多数哺乳动物的全血如人全血中的红细胞无核,故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞,以免影响白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量减少为5-20ul,不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。
6、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的 pH值调至此范围),pH快速考马斯亮蓝染色液(R-250型)值低于7.0会降低洗脱效率。
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文献和实验g ,加1mol/L HCl 48ml,加重蒸水80ml使其溶解,调pH6.7,定容至100ml, 4℃保存。5. TEMED(四乙基乙二胺)原液6.10%过硫酸铵(用重蒸水新鲜配制)7. pH8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液:称取Tris6.0g,甘氨酸28.8g,加蒸馏水约900ml,调pH8.3后,用蒸馏水定容至1000ml。置4℃保存,临用前稀释10倍。8. 考马斯亮蓝G250染色液:称100mg考马斯亮蓝G250,溶于200ml蒸馏水中,慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸,最后补足水
,Bradford,双缩脲法(Biuret 法),Folin 法(Lowry 法)和紫外分光光度计法。BCA 法的原理是在碱性条件下,氨基酸将二价铜还原为一价铜与 BCA 形成紫颜色的络合物,测定 562 nm 的 OD 值,所以如果样本里有还原剂(比如 DTT)的话就会对 BCA 的结果产生干扰。Bradford 法(考马斯亮蓝法)是在酸性条件下,加入考马斯亮蓝 G250 与蛋白质(主要是碱性或芳香族氨基酸)结合为蓝色化合物,吸光度值从 465nm 变成 595 nm,最后测定 595 nm 的 OD 值
(脱色液I加入0.25%考马斯亮蓝R―250)的容器内,脱色摇床染色2h或过夜。②弃去染色液,将凝胶在脱色液I(乙醇:冰乙酸:水=25:8:65)中继续在摇床上震荡脱色。为脱色完全,需数次更换脱色液I。③当凝胶上的斑点清晰、凝胶背景较浅时,倒去脱色液I,加入脱色液Ⅱ,凝胶置于脱色液Ⅱ(乙醇:冰乙酸:水=10:15:175)中保存。 (2)快速银染的主要步骤:45%乙醇+5%乙酸固定60min,水洗每次45min,共2次。用0.02%Na2 S2 03 敏化l~2min,水洗每次1min
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