超低分子量蛋白Marker I（3.3-22kD）

中文名:超低分子量蛋白Marker I（3.3-22kD）

英文名:Ultra low MW protein Marker I

CAS:N/A

级别:N/A

分子量:N/A

分子式:N/A

纯度:N/A

储存条件:-20°C

产品简介

    超低分子量蛋白Marker I用来测定SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量，由3种多肽和2种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.3kD-22kD.5条带的大小分别为 3.3,5.8,7.8,14.8,22KD。

使用方法：

第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用。

一、制胶

（一）配置分离胶

1、按照表一将不同体积的双蒸水，40%PAA(19：1),4×凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。

2、加入10%APS和TEMED,立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

3、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的水层，使凝胶表明保持平整。

4、静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

（二）配置浓缩胶

去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去

1、按照表一将不同体积的双蒸水，40%PAA(19：1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。

2、加入10%APS和TEMED,立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀

3、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

4、静置30-60分钟待凝胶聚合。

表一（一块厚度0.75mm凝胶用量）                            

	分离胶	浓缩胶
	18%T,5%C/6.0ml	5%T,3.3%C/4.0ml
40%PAA(19:1)	2.7ml	/
40%PAA(29:1)	/	0.5ml
4×凝胶缓冲液	1.5ml	1ml
乙二醇（电泳级）	1.8ml	/
ddH2O	/	2.5ml
10%APS	45ul	30ul
TEMED	9ul	6ul

 

注：如非必须，不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间

二、电泳

1、取一管分好的Marker样品，95℃处理5分钟，充分混匀后备用

2、将电泳槽的外槽加入1×阳极缓冲液，内槽加入1×阴极缓冲液，轻柔拨出梳子，将Marker或蛋白样品加入点样孔，80-120V电泳30-60分钟左右，待指示前沿到达离胶上沿时，把电压调至150-200V，至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳，整个电泳过程大约需要2-3小时。（注：如果电泳时间过短，染色时，指示前沿容易遮挡小于5kd的小肽）

表二 小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配置

一、1/40%PAA(29：1)(配制浓缩胶) 38.67g  1.33g 用ddH2O溶解后定容至100ml，过滤后使用，贮存：4℃	二、40%PAA(19：1)(配制分离胶) 38g  2g 用ddH2O溶解后定容至100ml，过滤后使用，贮存：4℃
三、4×凝胶缓冲液（配制凝胶用）[3M Tris 0.3%SDS pH8.45] Tris 182g   ddH2O  300ml   1.5gSDS或15ml 10%SDS 用HCl调pH至8.45  用ddH2O定容至500ml   贮存：4℃	四、10×阳极缓冲液[2M Tris pH 8.9] 贮存：4℃  Tris   121.1g   ddH2O  400ml  用HCl调pH值到8.9 用ddH2O定容至500ml 注：使用前稀释1×阳极缓冲液使用
五、10×阴极缓冲液（上槽缓冲液）[1M tris 1M Tricine 1%SDS pH8.3] TRIS 60.6g    Tricine  89.6g    SDS  5g 用ddH2O定容至500ml  贮存：4℃	六、2×Tricine蛋白样品上样缓冲液（10ml）1ml  1M  Tris-HCl pH6.8 2.4ml 甘油   0.8g SDS   0.31g DTT  2mg 考马斯亮蓝G-250 用灭菌ddH2O定容至10ml  混匀分装-20℃贮存备用
七、染色液   100ml  考马斯亮蓝G-250   0.25g    水  900ml	八、脱色液   100ml   水    900ml

三、染色，根据常规染色

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！